抗日本血吸虫膜蛋白特异性单链抗体的构建及表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2001, Vol. 19 ›› Issue (3): 2-140.

抗日本血吸虫膜蛋白特异性单链抗体的构建及表达

俞小淙,蒋欣,黄浩旻,张众,林晴,管晓虹,黄华樑

中国科学院遗传研究所!北京100101(俞小淙;蒋欣;黄浩旻;张众;林晴;黄华樑);南京医科大学寄生虫学教研组!南京210029(管晓虹)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2001-06-30 发布日期:2001-06-30

Gene Cloning, Construction and Expression of Single-Chain Fv (scFv) Against the Membrane Protein of Schisotosoma japonicum

YU Xiao-cong¹;JIANG Xin¹;HUANG Hao-min¹;ZHANG Zhong¹;LIN Qing¹;GUAN Xiao-hong²;HUANG Hua-liang^1*

1 Institute of Genetics;Chinese Academy of Sciences;Beijing 100101; 2 Department of Parasitology;Nanjing Medical University;N

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2001-06-30 Published:2001-06-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的　用基因工程抗体技术构建抗日本血吸虫膜蛋白特异的单链抗体。　方法　用抗体框架区的通用引物 PCR扩增抗日本血吸虫膜蛋白特异性单克隆抗体 NP11- 4的 VH 及 VL 基因 ,测序分析其核苷酸序列。用VH 和 VL 基因在 p THA90质粒载体中构建成单链抗体基因并诱导表达。　结果　扩增获得 NP11- 4的 VH 和 VL基因 ,经测序分析确定为新发现的抗体可变区序列 ,构建成排列顺序为 VH- linker- VL 的单链抗体基因 ,经诱导表达出与硫氧环蛋白融合的单链抗体 ,大小约为 36 .2 k Da,以包涵体形式存在。　结论　成功地构建和表达了抗日本血吸虫膜蛋白特异性单链抗体。

关键词: 单链抗体, 可变区基因, 构建, 表达, 日本血吸虫

Abstract: 　Objective To construct single chain antibody specific to membrane protein of Schistosoma japonicum by gonetic engineering technique. Methods The V\-H (heavy-chain variable region) and V\-L (light-chain variable region) genes were amplified by PCR from the genomic DNA of NP11-4 cell line, and sequenced by Sanger's method. The ScFv was constructed in pTHA90 vector using V\-H and V\-L genes, then expressed by IPTG. Results The V\-H and V\-L genes were obtained through PCR. The DNA sequences showed that V\-H and V\-L were new variable region genes of antibody. They were registered by GenBank. A ScFv gene with (Gly4Ser) 3 intralinker in the pTHA90 vector was successfully constructed. The ScFv was expressed as thioredoxin-fused proteins about 36.2 kDa. Conclusion A specific ScFv against the membrane protein of Schistosoma japonicum was constructed and expressed.

Key words: single-chain antibody, variable region genes, construction, expression, Schistosoma japonicum

俞小淙;蒋欣;黄浩旻;张众;林晴;管晓虹;黄华樑. 抗日本血吸虫膜蛋白特异性单链抗体的构建及表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2001, 19(3): 2-140.

YUXiao-cong;JIANGXin;HUANGHao-min;ZHANGZhong;LINQing;GUANXiao-hong;HUANGHua-liang*. Gene Cloning, Construction and Expression of Single-Chain Fv (scFv) Against the Membrane Protein of Schisotosoma japonicum[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2001, 19(3): 2-140.

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