猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

刘光学1，张少华1，郭爱疆1,2，侯俊玲1，魏艳玲1，王帅1，骆学农1,2*

1中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046；2江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州225009

出版日期:2016-08-30 发布日期:2016-11-07
基金资助:
国家自然科学基金（No. 31372433）

Identification, Expression and Antigenicity Analysis of Serpin B6 of Taenia solium

LIU Guang-xue1, ZHANG Shao-hua1, GUO Ai-jiang1,2, HOU Jun-ling1, WEI Yan-ling1, WANG Shuai1, LUO Xue-nong1,2*

1 State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046, China; 2 Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonosis, Yangzhou 225009, China

Online:2016-08-30 Published:2016-11-07
Supported by:
Supported by the National Natural Science Foundation of China（No. 31372433）

摘要/Abstract

摘要：

目的鉴定、表达猪带绦虫（Taenia solium）丝氨酸蛋白酶抑制剂（Tsserpin B6），探索其作为诊断抗原的可行性。方法利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Tsserpin B6特异引物，RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因，对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析，利用Clustal X1.83进行序列比对，并用MEGA 6.0进行系统进化分析。构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体，在大肠埃希菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达。纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹（Western blotting）鉴定。结果 Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp，编码376个氨基酸。其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域（NEEGAE和FTVDHPFLF），存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Tsserpin B6的表达产物相对分子质量（Mr）为53 000，主要以包涵体形式存在。Western blotting检测结果显示，所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应，在Mr 53 000处产生特异条带。结论克隆了Tsserpin B6基因，其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别。

关键词: 猪带绦虫, Tsserpin B6, 鉴定, 表达, 抗原性分析

Abstract:

Objective To identify and express serpin B6 of Taenia solium（Tsserpin B6） and explore its possible use as a diagnostic antigen. Methods Primers for Tsserpin B6 were designed according to T. solium genome and transcriptome data. The Tsserpin B6 gene was amplified from the total RNA of T. solium cysticercus and subsequently analyzed by bioinformatics. Multiple amino acid sequence alignments of Tsserpin B6 and other parasites serpins were created using the Clustal X1.83. Phylogenetic analyses were performed using the MEGA 6.0. The recombinant expression vector pET-30a-Tsserpin B6 was constructed and expressed in E. coli strain BL21 （DE3）. The expressed proteins were purified, isolated by SDS-PAGE, and analyzed by Western blotting using pig serum infected with T. solium cysticerci. Results The complete reading frame of Tsserpin B6 was 1 131 bp and encoded a protein of 376 amino acids. The encoded protein had a conservative reactive center loop and distinctive domains of NEEGAE and FTVDHPFLF, and harbored 9 potential linear B cell epitopes. The expressed products of Tsserpin B6 mainly existed as an inclusion body, and reacted with pig serum infected with T. solium, resulting in a specific band at the Mr 53 000. Conclusion The Tsserpin B6 gene was successfully cloned, and its expressed products can be recognized by pig serum infected with T. solium.

Key words: Taenia solium, Tsserpins B6, Identification, Expression, Antigenicity analysis

刘光学1，张少华1，郭爱疆1,2，侯俊玲1，魏艳玲1，王帅1，骆学农1,2*. 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

LIU Guang-xue1, ZHANG Shao-hua1, GUO Ai-jiang1,2, HOU Jun-ling1, WEI Yan-ling1, WANG Shuai1, LUO Xue-nong1,2*. Identification, Expression and Antigenicity Analysis of Serpin B6 of Taenia solium[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

[1]	普娜, 薄新文, 赵文卿, 陈旭珂, 张玉霞, 张艳艳, 孙艳, 王正荣. 细粒棘球绦虫钙网蛋白的原核表达及功能初步鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2025, 43(2): 223-230.
[2]	曹禹, 李烨, 高忠燕, 江波涛. 二叶冠缝吸虫的分离鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2025, 43(2): 236-240.
[3]	许昕洁, 李镜, 吴伊可, 杨凤, 单文昕, 章治鼎, 叶长江, 孙恩涛. 转录组测序分析粉尘螨抗辣根素的基因表达与机制[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2025, 43(1): 112-118.
[4]	李诗韵, 李慈怀, 陈凤, 郝明明, 李新娣, 赵银娇, 张冬琦, 张全富, 李芹翠, 张剑平, 陈绍荣, 罗天鹏, 刘榆华. 云南省大理白族自治州家畜片形吸虫感染情况调查及分子鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(6): 715-720.
[5]	陈云虹, 谢贤良, 陈宝建, 陈方美, 余文武. 福建省浦城县人群感染东方次睾吸虫的基因鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(6): 810-812.
[6]	孙连阳, 崔浩, 董晓楠, 康佳美, 丁玉林, 习娟, 杨洋, 贺志雄, 刘永宏, 赵丽. 内蒙古全沟硬蜱的鉴定、人工饲养及生活史观察[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(3): 345-353.
[7]	李健科, 张静, 刘柳, 刘谦豪, 张浩. 齐齐哈尔地区淡水螺体内4种吸虫幼虫的分子鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(3): 360-366.
[8]	李静, 杨树峰, 高文伟, 刘卿, 朱兴全, 郑文斌. 山西省晋中市猪刚地弓形虫的感染情况及基因型鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(3): 367-371.
[9]	蒋玲, 赵永波, 李天美. 我国外来入侵生物福寿螺的物种鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(3): 384-388.
[10]	李娜, 藏达热, 乌日力格, 阿拉腾布日古德, 海鹰, 哈斯苏荣. 内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况及分子鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(1): 36-41.
[11]	李启松, 杨李, 腾飞翔, 马桂芳. 屋尘螨过敏原Der p 4的克隆、表达、免疫原性鉴定及生物信息学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(1): 42-47.
[12]	王之谦, 王敬文, 宋秀梅. 斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白S2调节共生菌稳态的功能分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 397-403.
[13]	芦星, 王水怡, 陈林军, 刘明明, 刘雨桐, 朱慧茹, 姜冰冰, 杜少磊, 巴音查汗, 刘丹丹, 张伟. 马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 497-501.
[14]	段曰黎, 喻一奇, 朱浩翔, 王新宇. 非典型脑囊尾蚴病1例[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(1): 128-130.
[15]	侯昕伶, 李德伟, 施阳, 王茂林, 孜比姑·肉素, 阿比旦·艾尼瓦尔, 郑旭然, 康雪娇, 王慧, 李静, 张传山. 多房棘球蚴感染小鼠腹腔ST2⁺ T细胞亚群功能及其免疫检查点分子表达变化[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(6): 708-716.