猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

刘光学1，张少华1，郭爱疆1,2，侯俊玲1，魏艳玲1，王帅1，骆学农1,2*

1中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046；2江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州225009

出版日期:2016-08-30 发布日期:2016-11-07
基金资助:
国家自然科学基金（No. 31372433）

Identification, Expression and Antigenicity Analysis of Serpin B6 of Taenia solium

LIU Guang-xue1, ZHANG Shao-hua1, GUO Ai-jiang1,2, HOU Jun-ling1, WEI Yan-ling1, WANG Shuai1, LUO Xue-nong1,2*

1 State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046, China; 2 Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonosis, Yangzhou 225009, China

Online:2016-08-30 Published:2016-11-07
Supported by:
Supported by the National Natural Science Foundation of China（No. 31372433）

摘要/Abstract

摘要：

目的鉴定、表达猪带绦虫（Taenia solium）丝氨酸蛋白酶抑制剂（Tsserpin B6），探索其作为诊断抗原的可行性。方法利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Tsserpin B6特异引物，RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因，对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析，利用Clustal X1.83进行序列比对，并用MEGA 6.0进行系统进化分析。构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体，在大肠埃希菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达。纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹（Western blotting）鉴定。结果 Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp，编码376个氨基酸。其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域（NEEGAE和FTVDHPFLF），存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Tsserpin B6的表达产物相对分子质量（Mr）为53 000，主要以包涵体形式存在。Western blotting检测结果显示，所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应，在Mr 53 000处产生特异条带。结论克隆了Tsserpin B6基因，其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别。

关键词: 猪带绦虫, Tsserpin B6, 鉴定, 表达, 抗原性分析

Abstract:

Objective To identify and express serpin B6 of Taenia solium（Tsserpin B6） and explore its possible use as a diagnostic antigen. Methods Primers for Tsserpin B6 were designed according to T. solium genome and transcriptome data. The Tsserpin B6 gene was amplified from the total RNA of T. solium cysticercus and subsequently analyzed by bioinformatics. Multiple amino acid sequence alignments of Tsserpin B6 and other parasites serpins were created using the Clustal X1.83. Phylogenetic analyses were performed using the MEGA 6.0. The recombinant expression vector pET-30a-Tsserpin B6 was constructed and expressed in E. coli strain BL21 （DE3）. The expressed proteins were purified, isolated by SDS-PAGE, and analyzed by Western blotting using pig serum infected with T. solium cysticerci. Results The complete reading frame of Tsserpin B6 was 1 131 bp and encoded a protein of 376 amino acids. The encoded protein had a conservative reactive center loop and distinctive domains of NEEGAE and FTVDHPFLF, and harbored 9 potential linear B cell epitopes. The expressed products of Tsserpin B6 mainly existed as an inclusion body, and reacted with pig serum infected with T. solium, resulting in a specific band at the Mr 53 000. Conclusion The Tsserpin B6 gene was successfully cloned, and its expressed products can be recognized by pig serum infected with T. solium.

Key words: Taenia solium, Tsserpins B6, Identification, Expression, Antigenicity analysis

刘光学1，张少华1，郭爱疆1,2，侯俊玲1，魏艳玲1，王帅1，骆学农1,2*. 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

LIU Guang-xue1, ZHANG Shao-hua1, GUO Ai-jiang1,2, HOU Jun-ling1, WEI Yan-ling1, WANG Shuai1, LUO Xue-nong1,2*. Identification, Expression and Antigenicity Analysis of Serpin B6 of Taenia solium[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

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