白纹伊蚊唾液三磷酸腺苷二磷酸酶在毕赤酵母中的分泌表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (1): 19-73-75.

白纹伊蚊唾液三磷酸腺苷二磷酸酶在毕赤酵母中的分泌表达

吴松泉1 *，王光丽1，雷永良2，张凯波1

1 丽水学院医学院，丽水 323000；
2 丽水市疾病控制中心，丽水 323000

出版日期:2013-02-28 发布日期:2013-04-23

Secretory Expression of Salivary ATP Diphosphohydrolase(Apyrase)from Aedes albopictus in Pichia pastoris

WU Song-quan1 *，WANG Guang-li1，LEI Yong-liang2，ZHANG Kai-bo1

1 Medical College，Lishui Unversity，Lishui 323000，China; 2 Lishui Center for Disease Control and Prevention，Lishui 323000，China

Online:2013-02-28 Published:2013-04-23

摘要/Abstract

摘要： 采用RT?鄄PCR技术克隆编码白纹伊蚊(Aedes albopictus) 唾液三磷酸腺苷二磷酸酶(apyrase)的成熟肽cDNA序列，并克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游，构建pGAPZα-A-apyrase重组分泌表达载体。表达载体经BlnⅠ线性化处理后电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞，转化子经Zeocin抗性筛选和菌落PCR，成功构建了pGAPZα-A-apyrase/GS115工程菌。十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果显示，pGAPZα-A-apyrase/GS115的工程菌分泌表达了相对分子质量（Mr）约为60 000的重组apyrase蛋白。

关键词: 白纹伊蚊, ATP-二磷酸酶, 毕赤酵母, 表达

Abstract: The gene-coding mature apyrase protein from Aedes albopictus was amplified by RT-PCR and cloned in frame with the α-factor secretion signal peptide into Pichia pastoris secreting expression vector pGAPZα-A resulting in the pGAPZα-A-apyrase. After being linearized by BlnⅠ restriction enzyme， the recombinant pGAPZα-A-apyrase was trans-formed into Pichia pastoris GS115 by electroporation. Recombinant strains pGAPZα-A-apyrase/GS115 were screened on YPDS plates containing Zeocin and identified by PCR. The recombinant protein of apyrase (Mr 60 000) has been expressed in the supernatant of Pichia pastoris.

Key words: Aedes albopictus, Apyrase, Pichia pastoris, Secreted expression

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