中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2012, Vol. 30 ›› Issue (6): 8-450-454.
刘建1,2,胡薇2,3,徐斌2,王吉鹏3,王树奇3,王小宁1*
LIU Jian1,2, HU Wei2,3, XU Bin2, Wang Ji-peng3, Wang Shu-qi3, WANG Xiao-ning1 *
摘要: 目的 探讨金诺芬对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)童虫和成虫作用效果的差异及其作用靶点,测定金诺芬对宿主细胞的毒性。方法 用二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法体外测定金诺芬对重组SjTrx-1酶活性的影响。用日本血吸虫尾蚴感染4~6周龄雌性昆明鼠(童虫组10只小鼠,600~800条/只;成虫组10只小鼠,80~100条/只),灌注法收集童虫(15 d)和成虫(35 d)。虫体经无菌生理盐水充分洗涤后,转移至预先添加培养基的12孔板中,分别加入金诺芬和吡喹酮至其终浓度为1、5和10 μg/ml,显微镜下观察化合物处理2、24、48和72 h后虫体的形态改变和死亡情况。CCK-8试剂盒测定金诺芬(5和10 μg/ml)对3种人源宿主细胞(Hep G2、293T和Hela)的毒性。 结果 10 μg/ml金诺芬作用下,40 min内重组SjTrx-1还原胰岛素的总量减少54.5%。5 μg/ml金诺芬体外作用24 h后,成虫死亡率达75%,而童虫未见死亡;10 μg/ml金诺芬作用72 h后,童虫和成虫均全部死亡,但童虫死亡时间较成虫延迟。金诺芬和吡喹酮作用后,光镜下观察,虫体均出现颜色变灰暗、挛缩和卷曲等现象;电镜下可见虫体表被膜结构严重破坏。细胞毒性测试结果显示,5 μg/ml金诺芬可使细胞相对活力降低85%以上,而10 μg/ml时细胞几乎全部死亡。 结论 SjTrx-1是金诺芬作用靶点之一。金诺芬具有较强的细胞毒性作用,对日本血吸虫成虫和童虫的作用效果存在差异,对成虫的作用效果更显著。