TaqMan探针实时荧光PCR方法检测粪便中微小隐孢子虫卵囊

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2012, Vol. 30 ›› Issue (4): 21-333-335.

TaqMan探针实时荧光PCR方法检测粪便中微小隐孢子虫卵囊

邵景东1，吴琳2，吴福平1，傅春玲2 *，王毅谦1，范丽丽2

1 张家港出入境检验检疫局，张家港 215600；2 苏州大学医学部公共卫生学院，苏州 215123

出版日期:2012-08-30 发布日期:2012-10-26

Detection of Cryptosporidium parvum in Human Stool Using TaqMan Real-time Polymerase Chain Reaction

SHAO Jing-dong1, WU Lin2, WU Fu-ping1, FU Chun-ling2 *, WANG Yi-qian1, FAN Li-li2

1 Zhangjiagang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Zhangjiagang 215600, China; 2 School of Public Health, Suzhou University, Suzhou 215123, China

Online:2012-08-30 Published:2012-10-26

摘要/Abstract

摘要： 以微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）特异性DnaJ-like蛋白基因的保守序列为模板，设计和合成特异性引物和荧光标记探针，通过检测微小隐孢子虫卵囊DNA和加标模拟样品进行敏感性分析，建立标准曲线，并对其特异性和干扰性进行评价。结果显示，该方法只对微小隐孢子虫卵囊进行特异性扩增，其他常见的肠道原虫和肠道病原菌均不能扩增；微小隐孢子虫纯卵囊基因组DNA检测的灵敏度为26个/ml；对加标粪样可检测至2 600个/ml卵囊。提示本研究建立的实时荧光PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有快速、特异性和敏感性高等优点。

关键词: 微小隐孢子虫, TaqMan探针, 实时荧光PCR, 检测

Abstract: The special DnaJ-like protein gene of Cryptosporidium parvum was amplified through designing special primers and TaqMan probes within the conserved and specific regions for this gene. In this way, a rapid and stable method of real-time PCR assay for the detection of C. parvum was established. The specificity and sensitivity of PCR were also analyzed. By adding standard culture fluid in blank fecal sample, the sensitivity of the method was evaluated. The results showed that the detection limit of pure culture with real-time PCR assay was 26 oocysts/ml. The detection limit for C. parvum in artificially contaminated fecal sample was 2 600 oocysts/ml. The specificity of the method was verified with no amplification on DNA from other enteric parasites and bacteria. These results indicated that the real-time PCR method for C. parvum detection in fecal sample is simple, rapid, with high specificity and sensitivity.

Key words: Cryptosporidium parvum, TaqMan probe, Real-time PCR, Detection

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