中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (3): 1-161-166.
• 论著 • 下一篇
徐斌, 段新伟, 卢 徐斌, 段新伟, 卢艳, 陈绅波, 冯正, 胡薇艳, 陈绅波, 冯正, 胡薇
XU Bin, DUAN Xin-Wei, LU Yan, CHEN Shen-bo, FENG Zheng, HU Wei
摘要： 目的 克隆表达日本血吸虫（Schistosoma japonicum） P7抗原片段（GenBank登录号为EU121231），研究各虫期中该目的片段的转录和表达情况，初步评价其作为早期诊断抗原的潜力。 方法 将日本血吸虫童虫cDNA文库中免疫筛选出的阳性克隆P7进行体外扩增，将目的基因亚克隆至原核表达载体pET28a中。用双酶切的方法鉴定重组质粒，将阳性重组质粒转化至大肠埃希菌（E. coli）BL21（DE3）感受态细胞中，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达并纯化。用蛋白质印迹（Western blotting）分析初步鉴定表达产物的免疫诊断价值。利用逆转录PCR和Western blotting分析检测P7片段在日本血吸虫各个虫期中的转录和表达情况。以P7重组蛋白为抗原用间接ELISA检测感染日本血吸虫后14 d的兔血清（18份），日本血吸虫病（28份）、华支睾吸虫病（30份）和卫氏并殖吸虫病（20份）患者血清，以及健康人血清（30份），计算特异性和敏感性。 结果 成功构建了重组表达载体P7/pET28a，并在E. coli中表达。Western blotting分析结果显示P7重组蛋白能被感染日本血吸虫后14 d的小鼠血清和P7重组蛋白免疫的多抗兔血清识别，但不能被感染后42 d的小鼠血清识别，蛋白相对分子质量（Mr）约为20 100。采用逆转录PCR技术在尾蚴、童虫和成虫中均检测到了P7片段的mRNA。Western blotting分析结果显示，仅在童虫阶段检测到目的蛋白。间接ELISA检测感染早期兔血清的检出率为83.3%（15/18），检测日本血吸虫病患者血清的敏感性为75.0%（21/28），特异性为93.8%（75/80），与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清的交叉反应分别为6.7%（2/30）和5.0%（1/20）。 结论 日本血吸虫P7抗原可能为潜在的日本血吸虫病早期诊断的靶分子。
