中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (6): 1-401-405.
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许学年1 *，周岩1，董玉婷1，谭裕光2，包意芳1，徐斌1，程娜1，许洪波2，黎学铭2，冯正1
XU Xue-nian1 *，ZHOU Yan1，DONG Yu-ting1，TAN Yu-guang2，BAO Yi-fang1， XU Bin1，CHENG Na1，XU Hong-bo2，LI Xue-ming2，FENG Zheng1
摘要： 【摘要】 目的 筛选华支睾吸虫成虫cDNA表达文库，寻找和鉴别新颖的抗原基因，并分析其重组蛋白的免疫原性。 方法 以华支睾吸虫病患者混合血清免疫筛选华支睾吸虫成虫λZAP cDNA表达文库，将阳性噬菌体克隆、测序，对获得的核苷酸序列进行生物信息学分析。将目的基因成熟肽的编码区克隆至原核表达质粒pET28b（+）， 转化至大肠埃希菌BLR（DE3）， 异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。用组氨酸标签亲和纯化柱（Ni-NTA树脂）纯化表达产物， 蛋白质印迹（Western blotting）分析其免疫原性。以纯化的重组蛋白pET28b?鄄Cs2免疫BALB/c小鼠，制备免疫血清，ELISA检测抗体水平。 结果 共获得44个阳性克隆，其中3个克隆的氨基酸序列中均含有PPMP重复序列，将其命名为华支睾吸虫PPMP型抗原，将其中含有KPPMPGDRDA、QPPMPGGRDA串联重复多肽序列的抗原分别称为PPMPⅠ型和PPMPⅡ型抗原。经核苷酸序列同源性比较，PPMP型抗原是一个新的华支睾吸虫特异性抗原家族。PPMPⅠ型的Cs2基因和PPMPⅡ型的Cs3基因的成熟肽编码区在大肠埃希菌BLR（DE3）或BLR（DE3）pLysS中表达，并获得可溶性重组蛋白，2个重组蛋白的相对分子质量分别为Mr 22 000和Mr 39 000。重组蛋白可被华支睾吸虫病患者血清所识别。ELISA结果显示，免疫小鼠可产生高滴度（1 ∶ 64 000）特异性IgG抗体。 结论 发现华支睾吸虫PPMP型抗原基因家族，其重组蛋白具有较强的免疫原性。
