华支睾吸虫ATP合酶b亚基模拟亚细胞定位与细胞周期的关系

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (5): 2-329.

华支睾吸虫ATP合酶b亚基模拟亚细胞定位与细胞周期的关系

周红娟^1，2，余新炳¹，徐劲¹，胡凤玉¹，黄灿¹，赵俊红¹，马长玲^1，3，郑小凌¹，胡旭初^{1 *}

1 中山大学中山医学院寄生虫教研室，广州 510080；2 浙江省中西医结合医院中心实验室，杭州 310003；3 广州医学院病原生物学教研室，广州 510182

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-10-30 发布日期:2010-11-09
通讯作者: 胡旭初

Subcellular Mimical Localization of the ATP Synthase B Subunit from Clonorchis sinensis under Different Conditioins of Cell Cycling

ZHOU Hong-juan^1，2，YU Xin-bing¹，Xu Jin¹，HU Feng-yu¹，HUANG Can¹，ZHAO Jun-hong¹，MA Chang-ling^1，3，ZHENG Xiao-ling¹，HU Xu-chu^{1 *}

1 Department of Parasitology，Zhongshan Medical College of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China；2 Central Laboratory，Integrated Chinese and Western Medicine Hospital of Zhejiang Province，Hangzhou 310003，China；3 Department of Pathogenic Biology，Guangzhou Medical College，Guangzhou 510182，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-10-30 Published:2010-11-09
Contact: HU Xu-chu

摘要/Abstract

摘要： 目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基（CsATP-synt_B）核定位序列(NLS)介导该蛋白进入细胞核与细胞周期的关系，及该蛋白对自身和宿主同源基因表达的影响。方法将已构建的CsATP-synt_B与绿色荧光蛋白（GFP）融合表达质粒（pEGFP-N1-CsATP-synt_B）转染Hela细胞，转染细胞经同步化处理后，在激光共聚焦显微镜下观察在不同细胞周期相，细胞不同部位的荧光分布。流式细胞技术检测该融合蛋白表达量的变化，并通过半定量RT-PCR分析不同细胞周期相CsATP-synt_B和Hela细胞同源基因的表达。结果转染细胞经同步化处理后，流式细胞检测结果显示，空载体pEGFP-N1在G₀/G₁期Hela细胞中的表达量明显下降，而pEGFP-N1-CsATP-synt_B在该时期表达量呈上升趋势；在其他细胞周期时相，两者的荧光表达量的变化趋势相似。显微镜观察发现，在G₀/G₁期、S期和G₂/M期CsATP-synt_B集中在线粒体表达，G₁/S期细胞核内见绿色荧光，且多数细胞的绿色荧光集中见于核仁。在不同的细胞周期，半定量RT-PCR分析结果显示，该重组蛋白进入细胞核后，目的基因CsATP-synt_B和人源性ATP-synt_B（HomoATP-synt_B）mRNA的表达均呈上升趋势，CsATP-synt_B上升幅度较大，但两者的表达变化趋势一致。结论 CsATP-synt_B在G₁/S期进入细胞核，受细胞能量需求和细胞周期的调控。

关键词: 华支睾吸虫, ATP合酶b亚基, 细胞同步化, 亚细胞定位

Abstract: Objective To investigate the subcellular localization of ATP synthase b subunit from Clonorchis sinensis under different conditions of Hela cell cycling, and the effect of this protein on the expression of its encoding-gene and homologous host genes. Methods pEGFP-N1-CsATP-synt_B and the vector pEGFP-N1 were transfected into Hela cells, respectively. Transfected cells were synchronized in G₀/G₁by serum starvation, G₁/S, S cells by double thymidine block, and G₂/M cells by thymidine-Nocodozale block. After synchronization, the subcellular localization of the expressed fusion protein was observed with a laser confocal microscope. The expression level of this fusion protein in cells was detected by flow cytometry (FCM). The expression of CsATP-synt_B and HomoATP-synt_B in different cell cycle phases accessed by RT-PCR. Results FCM results indicated that in the G₀/G₁ phase the expression of pEGFP-N1 vector was decreased significantly, while pEGFP-N1-CsATP-synt_B expression showed an upward trend. In the other phases of cell cycle, the protein expression was similar in the above two kinds of plasmids. The intact CsATP-synt_B was expressed in mitochondria in the G₀/G₁， S， and G₂/M phases and nucleus during G₁/S phase. After the fusion proteins entered the nucleus, the mRNA expression of CsATP-synt_B and HomoATP-synt_B increased significantly. Conclusion CsATP-synt_B can be expressed in the nucleus during G₁/S phase, and regulated by the cell cycle and energy requirements.

周红娟;余新炳;徐劲;胡凤玉;黄灿;赵俊红;马长玲;郑小凌;胡旭初. 华支睾吸虫ATP合酶b亚基模拟亚细胞定位与细胞周期的关系[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(5): 2-329.

ZHOUHong-juan;YUXin-bing;XuJin;HUFeng-yu;HUANGCan;ZHAOJun-hong;MAChang-ling;ZHENGXiao-ling;HUXu-chu*. Subcellular Mimical Localization of the ATP Synthase B Subunit from Clonorchis sinensis under Different Conditioins of Cell Cycling[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2010, 28(5): 2-329.

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