猪囊尾蚴Ts3基因的克隆表达及编码蛋白的结构预测

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (1): 9-41.

猪囊尾蚴Ts3基因的克隆表达及编码蛋白的结构预测

郑胜生¹，孙军民²，夏子寰³，叶伟³，杨景华³，汪学龙^{1 *}

安徽医科大学 1 病原生物学教研室， 2 公共卫生学院，3 第一临床学院，合肥 230032

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-02-28 发布日期:2010-02-28

Cloning， Expression and Ｐrediction of Protein Structure ofTs3 Gene of Cysticercus cellulosae

ZHENG Sheng-sheng¹ ，SUN Jun-min²，XIA Zi-huan³，
YE Wei³，YANG Jing-hua³，WANG Xue-long^{1 *}

1 Department of Parasitology，Anhui Medical University，Hefei 23003，China；2 School of Public Health，Anhui Medical University，Hefei 23003，China；3 The First Clinical College，Anhui Medical University，Hefei 23003，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-02-28 Published:2010-02-28

摘要/Abstract

摘要： 目的寻找猪囊尾蚴病诊断抗原候选分子基因。方法用猪囊尾蚴病患者血清免疫筛选cDNA文库，用生物学软件EXPASY预测分析所获阳性蛋白基因（Ts3）及其编码蛋白的理化性质。对Ts3基因进行克隆，构建原核表达载体pET28a（+）-Ts3，并用十二烷基硫酸钠?鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析观察其表达情况。结果获得大小为531 bp的含完整阅读框（ORF）DNA序列的基因Ts3（GenBank登录号为EU338456），预测分析该蛋白结构和理化性质比较稳定，为非跨膜蛋白和含有较多蛋白激酶C磷酸化位点；将Ts3基因克隆入载体pET28a（+）诱导表达，获得相对分子质量（Mr）约 21 000蛋白，并能被囊尾蚴病患者血清识别。结论囊尾蚴Ts3重组蛋白具有免疫反应性。

关键词: 猪囊尾蚴, 免疫学筛选, 克隆, 表达

Abstract: Objective To discover a new gene of candidate molecule for the diagnosis of cysticercosis. Methods Cysticercus cellulosae cDNA library was immunoscreened with pooled serum of cysticercosis patients. The encoded protein of a new gene，Ts3，was analyzed through biology software（EXPASY） on line. The new gene was cloned，the prokaryotic expression vector pET28a（+）-Ts3 was constructed， and the expressed result was analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis（SDS-PAGE）and Western blotting. Results The new gene Ts3（GenBank accession No.EU338456）was obtained with 531 bp and an ORF of C. cellulosae. With relatively stable structure and physico-chemical properties，the new gene was anon-transmembrane protein and contained more protein kinase C phosphorylation site. To induce its expression， the Ts3 gene was cloned into the vector pET28a（+），and a protein with a relative molecular mass Mr 21 000 was obtained which was recognized by the sera of cysticercosis cases. Conclusion The Ts3 gene of C. cellulosae was expressed，and the protein shows adequate antigenicity.

Key words: Cysticercus cellulosae, Immunoscreening, Clone, Expression

郑胜生;孙军民;夏子寰;叶伟;杨景华;汪学龙. 猪囊尾蚴Ts3基因的克隆表达及编码蛋白的结构预测[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(1): 9-41.

ZHENGSheng-sheng;SUNJun-min;XIAZi-huan;YEWei;YANGJing-hua;WANGXue-long*. Cloning， Expression and Ｐrediction of Protein Structure ofTs3 Gene of Cysticercus cellulosae[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2010, 28(1): 9-41.

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