亚洲带绦虫烯醇化酶基因的原核表达、鉴定与组织定位

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (6): 2-462.

亚洲带绦虫烯醇化酶基因的原核表达、鉴定与组织定位

杜武英1, 戴佳琳1, 黄江1 *, 胡旭初2, 徐劲2, 余新炳2, 廖兴江1, 郎书源1

1 贵阳医学院寄生虫学教研室，贵阳 550004；2 中山大学中山医学院寄生虫学教研室，广州 510080

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-12-30 发布日期:2009-12-30

Prokaryotic Expression, Identification and Histolocalization of the Taenia asiatica Enolase Gene

DU Wu-ying1，DAI Jia-ling1，HUANG Jiang1 *，HU Xu-chu2，XU Jin2，
YU Xin-bing2，LIAO Xing-jiang1，LANG Shu-yuan1

1 Department of Parasitology，Guiyang Medical College，Guiyang 550004，China；2 Department of Parasitology，Zhongshan School of Medicine，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-12-30 Published:2009-12-30

摘要/Abstract

摘要： 目的表达亚洲带绦虫（Taenia asiatica，Ta）成虫烯醇化酶（enolase，ENO）基因，并对其进行组织定位和免疫反应性分析。方法通过大规模测序从亚洲带绦虫cDNA文库中确定ENO基因，PCR扩增目的片段，将其克隆至表达质粒pET-30a（+），在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）观察重组蛋白的表达情况，用镍离子金属螯合剂亲和层析柱纯化重组蛋白，蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组蛋白的免疫反应性。将重组蛋白免疫SD大鼠制备免疫血清，ELISA检测抗体水平，间接免疫荧光检测确定ENO在亚洲带绦虫成虫组织中的定位。结果 PCR、双酶切和DNA测序结果均表明，重组质粒pET-30a（+）-TaENO构建成功。SDS-PAGE结果显示，重组蛋白TaENO的相对分子质量（Mr）为47 000。经亲和层析获高纯度的蛋白，蛋白浓度为0.37 mg/ml。重组蛋白TaENO能被SD大鼠抗血清、感染亚洲带绦虫的猪血清和患者血清识别。间接免疫荧光检测结果显示，TaENO主要定位于成虫的表膜。结论纯化后的亚洲带绦虫成虫烯醇化酶重组蛋白具有较强的免疫反应性，烯醇化酶主要定位于成虫表膜。

关键词: 亚洲带绦虫, 烯醇化酶基因, 原核表达, 组织定位

Abstract: Objective To express enolase gene of Taenia asiatica, investigate the immunoreactivity of the recombinant TaENO pretein, and immuno-histolocalize the presence of the recombinant TaENO in adults of T. asiatica. Methods The gene encoding enolase of T. asiatica （TaENO） was cloned by high throughput sequencing from the cDNA library of adult T. asiatica. The coding region of TaENO was amplified by PCR, and cloned into a prokaryotic expression vector pET-30a（+）. The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL-21/DE3 and followed by expression of the protein induced by IPTG. The protein was purified by Ni-IDA affinity chromatography, and tested by SDS-PAGE. Its immunoreactivity was examined by Western blotting. The mice were immunized subcutaneously with purified TaENO formulated in Freund’s adjuvant. Serum samples were collected and analyzed for specific antibodies by ELISA. The localization of TaENO in adult worms was demonstrated by immunofluorescent technique. Results The recombinant expression plasmid was identified by PCR, double endonuclease digestion and sequencing. The recombinant TaENO was about Mr 47 000 with a concentration of 0.37 mg/ml. It was recognized by antisera of SD rats immunized with TaENO, sera of taeniasis patients and sera of infected swine. The immunofluorescence assay revealed that TaENO immune serum located in the tegument of T. asiatica adult. Conclusion The TaENO gene has been expressed with immunoreactivity, and the recombinant TaENO is immunolocalized in the tegument of T. asiatica adult.

Key words: Taenia asiatica, Enolase gene, Prokaryotic expression, Histolocalization

杜武英;戴佳琳;黄江;胡旭初;徐劲;余新炳;廖兴江;郎书源. 亚洲带绦虫烯醇化酶基因的原核表达、鉴定与组织定位[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009, 27(6): 2-462.

DUWu-ying;DAIJia-ling;HUANGJiang*;HUXu-chu;XUJin;YUXin-bing;LIAOXing-jiang;LANGShu-yuan. Prokaryotic Expression, Identification and Histolocalization of the Taenia asiatica Enolase Gene[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2009, 27(6): 2-462.

[1]	芦星, 王水怡, 陈林军, 刘明明, 刘雨桐, 朱慧茹, 姜冰冰, 杜少磊, 巴音查汗, 刘丹丹, 张伟. 马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 497-501.
[2]	曹天行, 刘军龙, 张志刚, 史康妍, 石苗, 关贵全, 李有全, 殷宏, 罗建勋. 环形泰勒虫重组TA04380蛋白的原核表达及ELISA的建立[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 362-368.
[3]	周岩, 陈韶红, 李浩, 程娜, 洪加林, 许学年. 卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 20-26.
[4]	宋宏宇, 梁雨晴, 华瑞其, 史媛, 阳爱国, 郭莉, 袁东波, 谢跃, 杨光友. 细粒棘球绦虫磷酸甘油酸变位酶的表达、定位和诊断价值的初步评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 194-201.
[5]	李润花, 关丽, 殷国荣. 刚地弓形虫滑行相关蛋白45的克隆、表达与免疫反应性检测[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(5): 563-567.
[6]	杨瑞, 熊乙丁, 郭珊珊, 廖业, 夏嫱, 郭锦锦, 杜联峰. 前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(4): 437-443.
[7]	王立群, 梁盼红, 张少华, 侯俊玲, 王莉杰, 毛立, 骆学农. 亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白的表达及其杂交瘤细胞株的筛选与鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(1): 70-74.
[8]	姚嘉青，刘丛珊，薛剑，陶奕，张皓冰*. 细粒棘球蚴原头节β4微管蛋白的可溶性表达、纯化及生物信息学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(3): 6-231-237.
[9]	濮珏彪1,2，唐莉莉3，殷岑楠1，杜新月1，吴健桦1，赵蔚1，刘登宇3，王兆军1，吴琛耘1*. 华支睾吸虫钙结合蛋白Cs16的重组表达及血清诊断应用的初步评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(3): 12-275-279.
[10]	司徒永立1,2, 邵正1, 邓莉1, 隋细香1, 李海舰1,3, 许琴英1, 何庆丰1, 彭礼飞1,2,3*. 毛首鞭形线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂TtSerpin1对蛋白酶的抑制作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(4): 6-342-346.
[11]	孙慧, 李瑾, 赵君, 刘功振, 尹昆, 崔勇, 肖婷, 徐超, 刘强, 魏庆宽, 黄晓丹, 黄炳成*. 刚地弓形虫微线体蛋白2在不同原核表达菌中的表达与鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(4): 7-347-350.
[12]	隋细香, 邵正, 蒋琦, 周叶, 何庆丰, 司徒永立, 邓莉, 彭礼飞. 美洲钩虫蛋白酶抑制剂NaKuI1对蛋白酶的抑制作用的鉴定和特性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(3): 259-264.
[13]	李星潘, 赵梦静, 史晓萌, 闫兰竹, 闫宝龙, 黄慧聪. 广州管圆线虫半乳糖凝集素-1基因的克隆、表达和凝集反应[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(1): 48-52.
[14]	李瑾，崔勇，尹昆，刘功振，肖婷，徐超，魏庆宽，黄炳成，孙慧*. 刚地弓形虫微线蛋白16基因片段原核表达、纯化及免疫反应性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2016, 34(3): 3-198-202.
[15]	赵殷奇1,2,3，李子华1,2,3，王浩2,4，朱明星1,2,3，牛楠2,3,5，王娅娜6，赵嘉庆2,4，李娜2,3,5，佟雪琪2,3,5，宋佳卉1,2,3，赵. 细粒棘球绦虫原头节抗原分子Eg-01883的克隆、表达及免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2016, 34(3): 5-208-214.