华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (2): 1-101.

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华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位

胡旭初¹，周红娟^1，2，胡凤玉¹，马长玲^1，3，赵俊红¹，黄灿¹，郑小凌¹，徐劲¹，余新炳^{1 *}

1 中山大学中山医学院寄生虫教研室，广州 510080；2 杭州市红十字会医院风湿免疫实验室，杭州 310003；3 广州医学院病原生物学教研室，广州 510182

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-04-30 发布日期:2009-04-30

Tissular and Subcellular Localization of the ATP Synthase B Subunit in Clonorchis sinensis

HU Xu-chu¹，ZHOU Hong-juan^1，2，HU Feng-yu¹，MA Chang-ling^1，3，ZHAO Jun-hong¹，HUANG Can¹，ZHENG Xiao-ling¹，XU Jin¹，YU Xin-bing^{1 *}

1 Department of Parasitology，Zhongshan College of Medicine，Sun Yat-sen University，Guangzhou，510080，China；2 Rheumatology Immunology Nephrology Laboratory，Hangzhou Red Cross Hospital，Hang zhou，311121，China；3 Department of Pathogenic Biology，Guangzhou Medical College，Guangzhou，510182，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-04-30 Published:2009-04-30

摘要/Abstract

摘要： 目的了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基（CsATP-synt_B）的虫体组织定位，并以HeLa细胞为替代模型观察其亚细胞定位。方法用CsATP-synt_B重组蛋白免疫SD大鼠，取其抗血清对华支睾吸虫成虫石蜡切片进行间接免疫荧光染色，观察CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫组织中的分布。根据生物信息学预测的CsATP-synt_B线粒体转运序列（MTS序列）和核定位序列（NLS序列）位置，设计4组引物［CsATP-synt_B全长序列，以及3个缺失突变体（MTS-缺失线粒体转运序列、NLS-缺失核定位序列、MTS-NLS-线粒体-核定位双缺失）引物］，扩增出全长基因和3个突变体基因，构建重组质粒pEGFP-N1-CsATP-synt_B1-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B30-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B（1-238）+（257-300）及pEGFP-N1-CsATP-synt_B（30-238）+（257-300）。将这些重组质粒用阳离子脂质体转染HeLa细胞，48 h后用激光共聚焦显微镜观察CsATP-synt_B全长基因和3个突变体在HeLa细胞的表达和亚细胞定位。结果 CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫中分布较为广泛，主要分布在腹吸盘、卵巢、卵黄腺和皮层。绿色荧光蛋白GFP表明CsATP-synt_B全长序列表达于线粒体或细胞核，线粒体转运序列缺失突变体表达于细胞核，核定位序列缺失突变体表达于线粒体，双缺失突变体仅表达于胞浆。结论 CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫的分布与线粒体的分布一致，主要集中在能量代谢较旺盛的组织部位。CsATP-synt_B蛋白既可进入线粒体，也可进入细胞核，理论预测的定位序列得到证实。

关键词: 华支睾吸虫, ATP合酶b亚基, 免疫组织化学, 亚细胞定位, 靶向序列

Abstract: Objective To illustrate the distribution of ATP synthase b subunit in the tissue of Clonorchis sinensis adult and its subcellular mimical localization in HeLa cells. Methods With the antiserum against recombinant CsATP-synt_B protein raised from SD rats as primary antibody， paraffin sections of the adult of C. sinensis were processed by the method of fluorescent immunohistochemistry to observe the distribution of CsATP-synt_B protein in adult worm. According to the prediction by bioinformatics of the definite mitochondrial targeting sequence（MTS）and probable Bipartite nuclear localization signals（NLS_BP）in CsATP-synt_B sequence， recombinant pEGFP-N1 plasmids containing the intact and three defective CsATP-synt_B sequence with single defect of MTS or NLS_BP or double defect respectively were constructed. The recombinant plasmids and the control plasmid-pEGFP-N1， pEYFP-Mito and H2B-CFP， were transfected into the HeLa cells by LipofectamineTM 2000 reagent and the subcellular location of the GFP fusion protein was observed with confocal microscopy. Results The CsATP-synt_B protein appeared to distribute all over the adult worm， especially abundant on the acetabulum， ovary， vitellarium and tegument. The intact CsATP-synt_B was definitely expressed in mitochondria and/or nucleus of infected HeLa cells， whereas the MTS-deleted mutant only in cytoplasma and nucleus， the NLS_BP-deleted mutant in mitochondria and cytoplasm， and the double defect mutant only in cytoplasm. Conclusion The distribution of CsATP-synt_B in adult is accord with that of mitochondria， and mainly exits in the organsand the tissues of active energy metabolism. This study first predicted and confirmed that CsATP-synt_B can be expressed in the nucleus.

Key words: Clonorchis sinensis, ATP synthase b subunit, Immunohistochemistry, Subcellular localization, Target sequence

胡旭初;周红娟;胡凤玉;马长玲;赵俊红;黄灿;郑小凌;徐劲;余新炳. 华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009, 27(2): 1-101.

HUXu-chu;ZHOUHong-juan;HUFeng-yu;MAChang-ling;ZHAOJun-hong;HUANGCan;ZHENGXiao-ling;XUJin;YUXin-bing*. Tissular and Subcellular Localization of the ATP Synthase B Subunit in Clonorchis sinensis[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2009, 27(2): 1-101.

[1]	李晓芹, 赖雅诗, 陈豫, 吕嘉慧, 韦帅, 张立林, 何姗姗, 石云良, 李艳文. 华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构观察[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 601-608.
[2]	徐银, 刘婷, 徐慧, 曾小军, 兰炜明, 龚志红, 戴坤教, 邱婷婷, 郝先, 谢曙英. PCR-CRISPR/Cas12a华支睾吸虫囊蚴检测方法的建立和应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 421-426.
[3]	蔡长煌, 张芝平, 卓鸣莺, 郭理平, 傅志辉, 刘亦若. 基于虫卵内转录间隔区2序列分析诊断麝猫后睾吸虫和华支睾吸虫感染[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 427-433.
[4]	李天星, 张家明, 徐晨曦, 王子戈, 郭晶洁, 李姗. 基于网络药理学探讨复方鳖甲软肝片治疗华支睾吸虫感染所致肝纤维化的机制[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 510-515.
[5]	王可艺, 舒黄芳, 方悦怡, 曾庆生, 宋铁. 2016—2020年广东省华支睾吸虫病高流行地区人群感染监测分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 629-634.
[6]	黄光华, 张波, 赖海涛, 吕国丽, 林源, 唐雯茜, 万孝玲, 蒋智华, 刘健. 2016—2019年广西灵山县人群华支睾吸虫感染情况分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 673-676.
[7]	王婷, 杨庆利, 冷静, 李宝莹, 申继清, 戴悦. 华支睾吸虫高迁移率族蛋白1同源蛋白的表达及其对小鼠巨噬细胞核转录因子-κB活化作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 305-308.
[8]	唐磊, 袁爽, 尹世辉, 葛涛, 葛晶雪, 邢智锋. 2015年黑龙江省人群华支睾吸虫感染状况调查[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 741-745.
[9]	陈宝建, 谢汉国, 谢贤良, 江典伟, 陈云虹, 高澜琳. 2016—2020年福建省浦城县华支睾吸虫病国家监测点人群感染情况分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(5): 716-719.
[10]	何战英, 王小梅, 吴文婷, 李旭, 任海林, 黎新宇. 2016—2020年北京市人体重点寄生虫感染监测分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 557-561.
[11]	陈喆, 袁长红, 姜唯声, 杨玉华, 蓝明兴, 刘克星, 曾小军, 朱慧慧. 2016和2018年江西省信丰县人群华支睾吸虫感染情况和知信行效果分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 69-75.
[12]	李安梅, 黄雨婷, 姚丹成, 朱爱娅, 李杨, 师伟芳, 戴佳芮, 耿燕, 佘丹娅, 张念恒. 2015年贵州省人体华支睾吸虫感染现状调查分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 125-128.
[13]	葛军, 姜唯声, 袁长红, 诸廷俊, 陈喆, 杨玉华, 蓝明兴, 戴坤教, 李东, 曾小军, 陈颖丹. 江西省信丰县华支睾吸虫病综合防治示范区3年防治成效[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 554-560.
[14]	袁长红, 蓝明兴, 诸廷俊, 王梅, 陈喆, 胡利峰, 黄琪, 姜唯声. 2016-2019年江西省信丰县人群华支睾吸虫病国家监测点人群感染情况分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 561-564.
[15]	陈喆, 叶斌, 姜唯声, 杨玉华, 赖博文, 曾小军, 周长海. 2016年江西省信丰县人群华支睾吸虫病知信行及影响因素分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(5): 567-573.

华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位

Tissular and Subcellular Localization of the ATP Synthase B Subunit in Clonorchis sinensis

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