从Giemsa染色的血膜中扩增间日疟原虫DNA方法探讨

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2006, Vol. 24 ›› Issue (4): 12-292.

从Giemsa染色的血膜中扩增间日疟原虫DNA方法探讨

肖方震;张山鹰;许龙善;黄江宏;谢汉国;欧阳榕

福建省疾病预防控制中心，福州 350004

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-08-30 发布日期:2006-08-30
通讯作者: 张山鹰

DNA Amplification of Plasmodium vivax Parasites from Giemsa-stained Blood Smears

IAO Fang-zhen;ZHANG Shan-ying;XU Long-shan;HUANG Jiang-hong;
XIE Han-guo;OU Yang-rong

Fujian Provincial Center for Diseases Control and Prevention，Fuzhou 350004，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-08-30 Published:2006-08-30
Contact: ZHANG Shan-ying

摘要/Abstract

摘要：

目的建立从Giemsa染色的血膜中提取疟原虫DNA的方法。方法分别采用Na₂HPO₄法和Chelex-100离子交换法，经过反复优化，提取血膜中的DNA，进行套式PCR扩增鉴定PvMSP-1等位基因型。结果用Na₂HPO₄法和Chelex-100离子交换法分别提取40张不同类型的间日疟原虫阳性血膜DNA，未染色的厚血膜全部扩增出目的基因条带，而染色的薄血膜未能扩增出目的基因条带。两种方法均可检测红细胞间日疟原虫感染率≥0.01％的血涂片。结论从多年保存的标准血膜中提取疟原虫DNA进行基因型鉴别是可行的。

关键词: 血膜, 间日疟原虫, 提取DNA

Abstract: Objective To develop methods of extracting DNA from malaria parasites on Giemsa-stained blood smears. Methods Improved Na₂HPO₄ method and Chelex-100 ion-exchange technique were used to extract DNA from Giemsa-stained or unstained blood smears. Nested PCR was employed for amplification and identification of allelotypes in the Plasmodium vivax merozoite surface protein-1（PvMSP-1）. Results Target DNA bands appeared in all samples of unstained thick blood smears， while no DNA bands were visible in the fixed and stained thin smears. Both methods identified PvMSP-1 alleles from smears with parasitemia of ≥0.01%. Conclusion It is feasible to identify PvMSP-1 alleles from Giemsa-stained blood smear.

Key words: Blood smear, Plasmodium vivax, DNA extraction

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