融合基因IFN-α1b/CSPⅡ原核表达载体的构建及在大肠埃希菌中的表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (1): 11-47.

融合基因IFN-α1b/CSPⅡ原核表达载体的构建及在大肠埃希菌中的表达

陈慧红¹,余新炳²,高兴政¹

1 北京大学医学部寄生虫学教研室，北京 100083 2 中山大学中山医学院寄生虫学教研室，广州 510089

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-02-28 发布日期:2005-02-28

Construction of Prokaryotic Expression Vector of the Fusion Gene IFN-α1b/CSPⅡ and Expression in E.coli

CHEN Hui-hong¹,YU Xin-bing²,GAO Xing-zheng¹

Department of Parasitology,Health and Science Center of Peking University,Beijing 100083,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-02-28 Published:2005-02-28

摘要/Abstract

摘要：

目的　构建融合基因IFN α1b/CSPⅡ的原核表达载体并予以表达。　方法　采用聚合酶链反应(PCR)从人基因组DNA中扩增出IFN α1b基因 ,克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1,构建原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b。利用PCR法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出环子孢子蛋白Ⅱ区 (CSPⅡ )基因 ,克隆入原核表达载体 pGEX 4T 1,构建原核表达载体pGEX 4T 1/CSPⅡ 。用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ将IFN α1b从原核重组质粒 pGEX 4T 1/IFN α1b中切下 ,克隆入经相同酶切的原核重组质粒pGEX 4T 1/CSPⅡ 中 ,构建融合基因的原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b/CSPⅡ。融合基因IFN α1b/CSPⅡ经异丙基 β D硫代半乳糖苷 (IPTG )诱导 ,在大肠埃希菌中进行初步表达。结果　构建的原核表达载体 pGEX 4T 1/IFN α1b、pGEX 4T 1/CSPⅡ和 pGEX 4T 1/IFN α1b/CSPⅡ经PCR和酶切鉴定与预期结果一致。证实融合基因IFN α1b/CSPⅡ拼接成功并正确地克隆入原核表达载体。在大肠埃希菌中表达出融合蛋白IFN α1b/CSPⅡ ,该融合蛋白经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析与理论预测值相符。经蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定具有免疫原性。　结论　构建了融合基因IFN α1b/CSPⅡ的原核表达载体 ,并在大肠埃希菌中表达了。

关键词: 融合基因IFN-α1b/CSPⅡ, 环子孢子蛋白Ⅱ, 基因重组, 序列分析, 基因表达

Abstract: Objective To Construct the prokaryotic expression vector of the fusion gene IFN-α1b/CSPⅡ. MethodsIFN-α1b was amplified from the human genomic DNA by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pGEX-4T-1. The recombinant plasmid pGEX-4T-1/IFN-α1b was constructed. Circumsporozoite proteinⅡ(CSPⅡ) was amplified from the Plasmodium falciparum genomic DNA by PCR and was cloned into the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1. The recombinant plasmid pGEX-4T-1/CSPⅡ was constructed. IFN-α1b was cut from the recombinant plasmid pGEX-4T-1/IFN-α1b digested with BamHⅠ and EcoRⅠ and ligated with the recombinant plasmid pGEX-4T-1/CSPⅡ also digested with BamHⅠ and EcoRⅠ . The recombinant prokaryotic plasmid pGEX-4T-1/IFN-α1b/CSPⅡ was constructed. The fusion gene IFN-α1b/CSPⅡ was expressed in E.coli by IPTG. Results The prokaryotic expression vector pGEX-4T-1/IFN-α1b, pGEX-4T-1/CSPⅡ and pGEX-4T-1/IFN-α1b/CSPⅡ were identified by PCR, enzyme digestion and gene sequencing. The expressed fusion protein/IFN-α1b/CSPⅡ in E.coli was identified by SDS-PAGE and Western blot. Conclusion The prokaryotic expression vector of the fusion gene IFN-α1b/CSPⅡ was successfully constructed, which was then expressed in E.coli .

Key words: Fusion gene IFN-α1b/CSPⅡ, Circumsporozoite proteinⅡ(CSPⅡ), Recombinant DNA, Sequence analysis, Gene expression

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