李瑾，崔勇，尹昆，刘功振，肖婷，徐超，魏庆宽，黄炳成，孙慧*
LI Jin, CUI Yong, YIN Kun, LIU Gong-zhen, XIAO Ting, XU Chao, WEI Qing-kuan, HUANG Bing-cheng, SUN Hui*
摘要： 目的 原核表达刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）微线蛋白16（micronemal protein 16，TgMIC16）的3个基因片段，并分析3个重组蛋白的免疫反应性。 方法 参照GenBank中TgMIC16基因序列，根据功能活性区将其分为3个片段（M16D1、M16D2、M16D3），分别设计引物，以刚地弓形虫RH株速殖子RNA为模板，通过RT-PCR扩增，获得预期的3个DNA片段，双酶切后连接至原核表达载体pET-32a（+），将重组质粒转化入大肠埃希菌（Escherichia coli）TOP10，经PCR、双酶切筛选阳性质粒，测序确认后转化至E. coli Rosetta，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测表达产物。重组蛋白经镍柱纯化后，分别以抗组氨酸（His）单抗和弓形虫感染兔血清为一抗，Western blotting分析其免疫反应性。 结果 TgMIC16 3个基因片段的RT-PCR扩增产物分别为1 806、1 290、855 bp。双酶切和测序结果显示，3个TgMIC16片段的重组表达质粒构建成功。SDS-PAGE分析结果显示，3个重组蛋白成功表达，且均为以包涵体的形式表达，相对分子质量（Mr）分别为88 000、68 000、52 000。Western blotting分析结果显示，3个纯化的表达蛋白均能被抗His单抗和弓形虫感染兔血清识别。 结论 成功构建并表达TgMIC16的3个功能活性区，且3个重组蛋白均表现出良好的免疫反应性。
