中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (3): 2-170-175.
陈清，吴琛耘，冯艳，吴健桦，姚馨萦，徐大刚，王兆军*
CHEN Qing, WU Chen-yun, FENG Yan, WU Jian-hua, YAO Xin-ying，XU Da-gang, WANG Zhao-jun*
摘要： 目的 真核表达日本血吸虫虫卵蛋白，并评价其在血吸虫病免疫学诊断中的作用。 方法 提取日本血吸虫虫卵RNA，逆转录后获得cDNA。PCR扩增日本血吸虫虫卵特异性或高表达基因SJCHGC01695（SjE16）、SJCHGC00856（SjIMA8）、SJCHGC06249（SjTOR）、SJCHGC06324（SjP40）、SJEFTD02（SjSLP）、SJCHGC06679（SjPPIase）和SJCHGC06529（SjRobl），亚克隆至真核表达载体pPIC9K。重组质粒电转至毕赤酵母GS115菌株后，甲醇诱导目的蛋白表达。镍-次氮基三乙酸（Ni-NTA）亲和层析纯化获取重组蛋白后，用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）对其进行分析鉴定。以血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）、重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl单用，3个重组蛋白两两伍用，及全部伍用作为包被抗原，ELISA法检测血吸虫感染小鼠血清、急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清中相应抗体的反应性。 结果 PCR扩增获得7个日本血吸虫虫卵高表达基因，经酵母重组表达和Ni-NTA亲和层析纯化后成功获得3个重组蛋白SjE16、SjPPIase和SjRobl。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果显示，所获得的重组蛋白为目的蛋白。ELISA检测结果显示，血吸虫感染小鼠血清和血吸虫病患者血清中均可检测出被SjE16、SjPPIase和SjRobl识别的特异性IgM和IgG抗体。在急性血吸虫病患者中上述3种抗原IgM的检出率分别为80%、60%和80%，IgG检出率分别为40%、80%和70%。伍用组中，SjE16和SjRobl伍用抗原，检测急性血吸虫病患者血清中IgM抗体的敏感性为100%，高于其单独为抗原的敏感性。 结论 获得的3个日本血吸虫虫卵蛋白（SjE16、SjPPIase和SjRobl）均具有血吸虫病诊断的潜能，其中SjE16和SjRobl伍用抗原可提高急性血吸虫病诊断敏感性。
