卫氏并殖吸虫基因片段的克隆与鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2003, Vol. 21 ›› Issue (3): 5-146.

卫氏并殖吸虫基因片段的克隆与鉴定

凌家俭,侯敏,刘剑南,章子豪,张耀娟

南京医科大学病原生物学与免疫学系,南京 210029

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2003-06-30 发布日期:2003-06-30

Cloning and Identification of the Gene Fragments of Paragonimus westermani

LING Jia-jian,HOU Min,LIU Jian-nan,ZHANG Zi-hao,ZHANG Yao-juan

Department of Pathogenic Biology and Immunology,Nanjing Medical University,Nanjing 210029

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2003-06-30 Published:2003-06-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的从卫氏并殖吸虫成虫cDDA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法采用预吸收成虫抗原免疫兔血清(IRS,多抗)筛选阳性克隆,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。序列分析后,对筛选的重组子进行双酶切,亚克隆入表达载体pRESETB,并转化大肠杆菌BL-21细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Westernblotting分析鉴定。结果所筛选的阳性克隆插入片段约800bp。DNA序列分析显示其为编码半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L的基因序列。Pw-2重组子特异性表达产物约为32kDa,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异地识别。结论从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库筛选的重组质粒Pw-2编码属于半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L。

关键词: 卫氏并殖吸虫, cDNA文库, 重组蛋白

Abstract: 　Objective To screen and identify the recombinants from the cDNA library of the adult Paragonimus west-ermani (PwA) for immunodiagnosis and immunoprophylaxis. Methods PwA cDNA library was screened with the PwA antigen immunized rabbit sera(IRS) pre-absorbed by the extract of E. coli XLl-Blue. The recombinants from positive clones were amplified by PCR, sequenced and cut off by KpnI/BarnHI and, then sub-cloned into pRESETB vector. The fusion protein was expressed,analysed by SDS-PAGE and identified by Western blotting with immune rabbit serum against worm antigen of Paragonimus westerrnani. Results The inserted cDNA fragment from the positive clone Pw-2 was about 800 bp, which contained an open reading frame(ORF) encoding Pw pre-procathepsin L belonging to cysteinase family. Expression product of Pw-2 was a fusion protein of 32 kDa, which can be recognized by immune rabbit serum against worm antigen of Paragonimus 晈esterrnani. Conclusion A recombinant plasmid Pw-2 encodes Pw pre-procathepsin L is constructed.

Key words: Paragonimus westermani, cDNA library, recombinant protein

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