中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2020, Vol. 38 ›› Issue (2): 201-206.doi: 10.12140/j.issn.1000-7423.2020.02.011
王婵1,2, 杨松昊1,2, 董飞1,2, 杜先才1,2, 杨继辉2, 牛楠1,2, 朱明星2, 王浩1,3, 王娅娜2,4, 赵巍2,4,*()
Chan WANG1,2, Song-hao YANG1,2, Fei DONG1,2, Xian-cai DU1,2, Ji-hui YANG2, Nan NIU1,2, Ming-xing ZHU2, Hao WANG1,3, Ya-na WANG2,4, Wei ZHAO2,4,*()
摘要:
目的 初步探讨长链非编码RNA 017418(lncRNA 017418)和细胞因子在细粒棘球蚴重组蛋白P29(rP29)诱导小鼠产生免疫反应中的表达。方法 重组融合表达菌株pET28a-P29/BL21与LB液体培养基混合孵育,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯化rP29。36只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、佐剂组和免疫组,每组12只,免疫组将纯化的10 μg rP29与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,腹部皮下3点注射,总剂量100 μl/鼠,佐剂组注射等体积弗氏完全佐剂,对照组不作处理;首次免疫后2周,相同剂量加强免疫1次,加强免疫采用弗氏不完全佐剂。加强免疫后2周,无菌环境下制备脾细胞悬液,分离淋巴细胞;流式细胞术分选淋巴细胞亚群CD4 + T、CD8 + T和B淋巴细胞;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA 017418、Notch1、白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-10在淋巴细胞中的表达量;采用SPSS 17.0统计学软件和GraphPad Prism6.0软件对实验结果进行分析。 结果 经IPTG诱导表达、亲和层析法纯化,rP29蛋白相对分子质量(Mr)约为31 000。qRT-PCR检测lncRNA 017418在脾淋巴细胞中的相对表达量,免疫组为2.25 ± 0.10,高于对照组(0.81 ± 0.05)和佐剂组(0.99 ± 0.13)(P < 0.01)。流式细胞术分析的CD4 + T、CD8 + T和B淋巴细胞所占比例分别为:对照组22.0%、9.2%和59.8%,佐剂组22.8%、7.6%和60.7%,免疫组22.1%、9.7%和60.4%。LncRNA 017418在免疫组CD4 + T淋巴细胞中的相对表达量为1.49 ± 0.03,高于对照组(0.97 ± 0.02)和佐剂组(1.06 ± 0.10)(P < 0.01),LncRNA 017418在免疫组CD8 + T细胞中的相对表达量为1.87 ± 0.12,与对照组(2.06 ± 0.14)和佐剂组(2.00 ± 0.09)相比,差异无统计学意义(P > 0.05),LncRNA 017418在免疫组B淋巴细胞中的相对表达量为1.03 ± 0.03,与对照组(0.97 ± 0.07)和佐剂组(1.08 ± 0.12)相比,差异无统计学意义(P > 0.05)。Notch1在免疫组CD4 + T淋巴细胞中的相对表达量为1.92 ± 0.04,高于对照组(1.10 ± 0.10)和佐剂组(1.20 ± 0.08)(P < 0.01),IL-2的相对表达量为1.45 ± 0.07,高于对照组(1.07 ± 0.08)和佐剂组(1.09 ± 0.11)(P < 0.05);IFN-γ的相对表达量为1.51 ± 0.11,高于对照组(0.92 ± 0.05)和佐剂组(1.03 ± 0.14)(P < 0.01、 0.05);IL-10的相对表达量为0.52 ± 0.01,低于对照组(0.95 ± 0.04)和佐剂组(1.05 ± 0.10)(P < 0.01);对照组和佐剂组比较,差异均无统计学意义(P > 0.05)。Pearson相关系数分析lncRNA 017418与Notch1、IL-2、IFN-γ之间存在正相关关系(r = 0.824 4、0.590 2、0.841 5,均P < 0.01),与IL-10之间存在负相关关系(r = -0.443 2,P < 0.05)。 结论 LncRNA 017418在细粒棘球蚴rP29诱导的小鼠中表达上调,Notch1、IL-2、IFN-γ在CD4 + T淋巴细胞中表达上调,IL-10在CD4 + T淋巴细胞中表达下调。
中图分类号: