基于线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1基因鉴别华支睾吸虫和扇棘单睾吸虫的双重PCR法的建立

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2018, Vol. 36 ›› Issue (2): 187-189.

基于线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1基因鉴别华支睾吸虫和扇棘单睾吸虫的双重PCR法的建立

蒋智华, 杨庆利^*(), 杨益超

广西壮族自治区疾病预防控制中心,广西病毒性肝炎防治研究重点实验室,南宁 530028

收稿日期:2017-09-21 出版日期:2018-04-28 发布日期:2018-04-24
通讯作者: 杨庆利
基金资助:
国家自然科学基金（No. 31260221）

Development of cytochrome c oxidase subunit 1 gene-based duplex PCR for identifying Clonorchis sinensis and Haplorchis taichui

Zhi-hua JIANG, Qing-li YANG^*(), Yi-chao YANG

Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Prevention and Control, Guangxi Key Laboratory for the Prevention and Control of Viral Hepatitis, Nanning 530028, China

Received:2017-09-21 Online:2018-04-28 Published:2018-04-24
Contact: Qing-li YANG
Supported by:
Supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 31260221)

摘要/Abstract

摘要：

分别提取华支睾吸虫和扇棘单睾吸虫的基因组DNA,针对两种吸虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1（COX1）基因设计引物,进行单重和双重PCR扩增。用针对华支睾吸虫的3对引物进行单重PCR扩增,FC1/RC1和FC3/RC3引物分别扩增出328 bp和356 bp的特异性目的条带,而FC2/RC2引物未扩增出任何条带;用针对扇棘单睾吸虫的FH1/RH1和FH2/RH2引物进行单重PCR扩增,分别扩增出200 bp和190 bp的特异性目的条带。用华支睾吸虫FC1/RC1引物,结合扇棘单睾吸虫的FH1/RH1和FH2/RH2引物,分别进行双重PCR扩增,均能扩增出特异性条带,彼此间无干扰。

关键词: 华支睾吸虫, 扇棘单睾吸虫, 线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1基因, 双重PCR

Abstract:

Genomic DNA was extracted from Clonorchis sinensis and Haplorchis taichui, primers for cytochrome c oxidase subunit 1(COX1) gene were designed, respectively, and single and duplex PCR were performed. Single PCR for C. sinensis using three pairs of primers, FC1/RC1 and FC3/RC3 primer pairs generated specific bands of 328 bp and 356 bp, respectively, while no band was produced when using the FC2/RC2 primer pair. Similarly, single PCR using FH1/RH1 and FH2/RH2 primer pairs for H. taichui produced specific bands of 200 bp and 190 bp, respectively. Furthermore, duplex PCR combining the FC1/RC1 primer pair with FH1/RH1 or FH2/RH2 primer pair resulted in specific bands for both C. sinensis and H. taichui, with no cross-species reaction.

Key words: Clonorchis sinensis, Haplorchis taichui, Cytochrome c oxidase subunit 1 gene, Duplex PCR

中图分类号:

R383.2

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图/表 4

表1

图1

图2

图3

参考文献 14

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名称	GenBank登录号	引物名称	序列5′→3′	位置/nt	扩增条带长度/bp
华支睾吸虫	AF096229^a	FC1	GCCTATAGTGAAAAGCACCA	104~431	328
		RC1	GTTAATATTGCCGGGGTTTG
		FC2	ACAAAACCCGGATTATCCAA	124~449	326
		RC2	GCATCCTGAGGTTTATGTGT
		FC3	TAAACCCCGCCTATAGTGAA	96~451	356
		RC3	GGGCATCCTGAGGTTTATG
扇棘单睾吸虫	EF055885^b	FH1	TGGGTTGGATGTTAAGACG	154~353	200
		RH1	AAGAAGACAACACAATCCCG
		FH2	AGACACATTTGTAGGACGTTA	32~221	190
		RH2	TACCTGTGGGGACTCCTA

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