中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2017, Vol. 35 ›› Issue (1): 59-63.
夏瑜椰, 徐倩, 孙婷婷, 方浩, 刘蔚, 陆施娟, 方政*()
Yu-ye XIA, Qian XU, Ting-ting SUN, Hao FANG, Wei LIU, Shi-juan LU, Zheng FANG*()
摘要:
目的 观察马来丝虫肌球蛋白29(Brugia malayi myosin 29,BmM29)表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmM29和原核表达的纯化重组蛋白rBmM29免疫小鼠诱导的免疫应答效果。方法 在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21诱导表达重组蛋白rBmM29,纯化后作为重组蛋白疫苗;纯化真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-BmM29作为核酸疫苗。核酸疫苗免疫注射部位为小鼠后腿胫前肌,重组蛋白为皮下多点注射。60只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E组,每组12只,分别注射PBS(100 μg)、pcDNA3.1(+)/CpG(100 μg/30 μg)、pcDNA3.1(+)-BmM29/CpG(100 μg/30 μg)、rBmM29/CpG(50 μg/30 μg)、pcDNA3.1(+)-BmM29/rBmM29/CpG(前2次注射pcDNA3.1(+)-BmM29/CpG 100 μg/30 μg,第3次注射rBmM29/CpG 50 μg/30 μg),共免疫3次,每次免疫间隔2周。初次免疫后第4、6、8周,眼球摘除法采血制备血清,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体效价。免疫第8周处死小鼠,制备脾细胞悬液培养48 h,ELISA检测培养上清中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。结果 ELISA检测结果显示,A、B、C、D和E组小鼠初次免疫后第4周血清中抗体的吸光度(A490值)分别为0.038 ± 0.050、0.053 ± 0.009、0.360 ± 0.035、0.456 ± 0.025、0.370 ± 0.025,第6周分别为0.045 ± 0.003、0.045 ± 0.005、0.510 ± 0.018、0.548 ± 0.010、0.552 ± 0.018,第8周分别为0.041 ± 0.004、0.044 ± 0.009、0.606 ± 0.047、0.674 ± 0.042、0.770 ± 0.041,C、D、E组均高于A、B组(P < 0.05),第8周时,E组IgG抗体的A490值高于C组和D组(P < 0.05)。初次免疫后第8周,A至E组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的水平分别为(47.72 ± 8.94)、(50.43 ± 2.81)、(304.78 ± 8.42)、(242.28 ± 5.99)、(426.52 ± 6.76)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P < 0.05),E组高于C组和D组(P < 0.05);小鼠脾细胞培养上清中IL-4的水平分别为(60.00 ± 11.14)、(57.71 ± 15.95)、(93.17 ± 12.56)、(96.67 ± 11.48)、(101.17 ± 5.81)pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P < 0.05)。结论 pcDNA3.1(+)-BmM29核酸疫苗和rBmM29重组蛋白均可诱导BALB/c小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答,核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果更佳。
中图分类号: