中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2014, Vol. 32 ›› Issue (3): 6-193-197.
李星潘，曹国梅，邢翠翠，华倩倩，张亮亮，梁韶晖*
LI Xing-pan，CAO Guo-mei，XING Cui-cui，HUA Qian-qian，ZHANG Liang-liang，LIANG Shao-hui*
摘要： 目的 克隆、表达白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP编码基因并分析其抗原性。 方法 运用生物信息学方法分析alALP与aegyptin氨基酸序列（GenBank登录号为ABF18122.1）的同源性、二级结构和抗原肽段。提取白纹伊蚊唾液腺总RNA，根据alALP的基因编码序列（GenBank登录号为AY826121）设计引物，RT-PCR扩增目的基因，亚克隆至pGEX-6P-1质粒，转化大肠埃希菌（E. coli）BL21，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析重组蛋白表达情况。重组aegyptin相似蛋白（GST-alALP）经还原型谷胱甘肽（Glutathione Sepharose 4B）亲和层析法纯化后，皮下注射免疫BALB/c小鼠，每次免疫剂量60 μg，共免疫3次，每次间隔2周，制备小鼠抗GST-alALP血清。分别以小鼠抗GST-alALP血清和白纹伊蚊叮咬后小鼠血清为一抗，Western blotting分析GST-alALP蛋白的抗原性。结果 生物信息学预测结果显示，alALP与aegyptin的氨基酸序列具有65.58%的同源性，二级结构高度相似并具有一段保守的抗原多肽。RT?鄄PCR结果显示，alALP成熟肽基因扩增产物约为762 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示，重组质粒pGEX-6p-1-alALP构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果显示，经IPTG诱导获得相对分子质量（Mr）约56 000的可溶性重组融合蛋白。Western blotting结果显示，GST-alALP蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和白纹伊蚊叮咬后的小鼠血清识别。 结论 克隆的alALP成熟肽基因能在原核表达系统中高效表达，且具有抗原性。
