华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (3): 3-172-176.

华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价

周岩, 许学年, 姚恺龄, 张鸿满, 程娜, 包意芳, 张陆娟, 徐斌, 江河, 黎学铭, Peter Chun, 冯正

1 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心，上海 200025；2 益思美诠生物科技（上海）有限公司，上海 201206；3 广西壮族自治区疾病预防控制中心，南宁 530028

出版日期:2011-06-30 发布日期:2012-09-27

Evaluation of Clonorchis sinensis PPMP Ⅰ Antigen Cs2 Recombinant Protein for Immunodiagnosis of Clonorchiasis

ZHOU Yan, XU Xua-Nian, YAO Kai-Ling, ZHANG Hong-Man, CHENG Na, BAO Yi-Fang, ZHANG Lu-Juan, XU Bin, JIANG He, LI Xua-Ming, Peter Chun, FENG Zheng

1 National Institute of Parasitic Diseases，Chinese Center for Disease Control and Prevention；Laboratory of Parasite and Vector Biology，MOH；WHO collaborating Centre for Malaria，Schistosomiasis and Filariasis，Shanghai 200025，China；2 EASE-Medtrend Biotech （Shanghai） LTD，Shanghai 201206，China；3 Guangxi Center for Disease Control and Prevention，Nanning 530028，China

Online:2011-06-30 Published:2012-09-27

摘要/Abstract

摘要： 目的应用华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白（rCs2）建立2种华支睾吸虫病免疫学检测方法，并进行初步评价。方法以可溶性rCs2作为诊断抗原，建立间接ELISA检测方法，并研制胶体金免疫层析检测（GICA）动力流体型试条，检测血清中的特异性抗体。采用ELISA法和GICA试条共检测35例华支睾吸虫虫卵粪检阳性患者、15例日本血吸虫病患者、15例卫氏并殖吸虫病患者和13例猪囊尾蚴病患者的血清，以及33份健康人血清。为进一步评价诊断价值，8只新西兰兔各感染600个华支睾吸虫囊蚴，随机均分为感染组和治疗组，感染第56天，治疗组各兔给予吡喹酮治疗[150 mg/（kg·d）×2 d]，用ELISA法和GICA法检测两组兔0~44周抗rCs2特异性抗体的消长。结果 ELISA法的敏感性为71.4%（25/35），特异性为93.4%（71/76），总符合率为86.5%（96/111），与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病和猪囊尾蚴病患者血清的交叉反应阳性率分别为1/15、1/15和1/13。GICA试条检测法的敏感性为85.7%（30/35），特异性为92.1%（70/76），总符合率为90.1%（100/111）。经ELISA检测，感染组兔自感染后第4周抗rCs2特异性抗体水平开始上升，于第6周达到高峰，随后快速下降，至第20周已呈较低水平；治疗组的特异性抗体消长趋势同感染组，同一时点的2组实验兔的抗体水平差异无统计学意义（P>0.05）。GICA试条检测结果表明，2组兔血清均仅在4~16周检出阳性。结论以PPMPⅠ型抗原rCs2建立的间接ELISA方法和GICA动力流体型试条对华支睾吸虫病具有较好的诊断价值。

关键词: 华支睾吸虫, 免疫学诊断, ELISA, 胶体金免疫层析检测, 动力流体型血清学, 抗体消长

Abstract: Objective To develop and preliminarily evaluate two immunodiagnostic methods for clonorchiasis using Clonorchis sinensis PPMP Ⅰ antigen Cs2 recombinant protein （rCs2）. Methods Using the soluble rCs2， an indirect ELISA and a colloidal-gold immuno-chromatography assay （GICA） dynamic flow strip was developed for detecting specific antibodies in serum. Serum samples from 35 egg-positive clonorchiasis patients， 33 healthy individuals， 15 schistosomiasis patients， 15 paragonimiasis westermani patients and 13 cysticercosis patients were examined by ELISA and GICA strip test. To further evaluate the diagnostic value of these two methods， eight New Zealand rabbits were randomly divided into infected group and treatment group. Each rabbit was infected with 600 C. sinensis metacercaria. Rabbits in treatment group were treated with praziquantel [150 mg/（kg·d）×2 d] individually at day 56 post-infection. ELISA and GICA strip test were used to observe the dynamic changes of specific antibodies against rCs2 in the two parallel groups during the period of 0-44 weeks. Results The sensitivity， specificity and total coincidence rate determined by the ELISA method were 71.4%（25/35）， 93.4%（71/76）, and 86.5%（96/111）， respectively， and the cross reaction with schistosomiasis， paragonimiasis and cysticercosis patients were 1/15， 1/15, and 1/13， respectively. The sensitivity， specificity and coincidence rate in the GICA strip test were 85.7%（30/35）， 92.1%（70/76）, and 90.1%（100/111）， respectively. In C. sinensi-infected rabbits， antibodies level began to increase at 4 weeks after infection， peaked at the 6th week， and declined rapidly to a lower level in the 20th week， while the changing pattern of antibodies level in the treatment group was similar with that of infected group （P>0.05）. In the GICA strip test， antibodies in two groups could be detected in 4-16 weeks. Conclusion Indirect ELISA and the GICA dynamic flow strip developed in this study may be of value in the immunodiagnosis of clonorchiasis.

Key words: Clonorchis sinensis, Immunodiagnosis, ELISA, Colloidal-gold immuno-chromatography assay （GICA）, Dynamic flow serology, Antibody dynamic

周岩, 许学年, 姚恺龄, 张鸿满, 程娜, 包意芳, 张陆娟, 徐斌, 江河, 黎学铭, Peter Chun, 冯正. 华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(3): 3-172-176.

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