聚合酶链反应检测蚊体内马来丝虫幼虫的实验

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2001, Vol. 19 ›› Issue (2): 12-106.

聚合酶链反应检测蚊体内马来丝虫幼虫的实验

王莹,戴晓冬,田晓光,崔昱,李杰,袁晓东,孙德建

大连医科大学寄生虫学教研室!大连116027(王莹;戴晓冬;田晓光;崔昱;李杰);宝生物工程(大连)有限公司!大连116600(袁晓东);中国预防医学科学院寄生虫病研(孙德建)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2001-04-30 发布日期:2001-04-30

Studies on Detecting Brugia malayi Larva in Mosquitoes by Polymerase Chain Reaction

WANG Ying ¹;DAI Xiao dong ¹;TIAN Xiao guang ¹;CUI Yu ¹;LI Jie ¹;YUAN Xiao dong ²;SUN De jian ³

1 Department of Parasitology;Dalian Medical University;Dalian 116027; 2 Takara Biotechnology Co. Ltd.;Dalian 116600; 3 Institu

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2001-04-30 Published:2001-04-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的　建立一种特异、灵敏和简捷的聚合酶链反应 (PCR)检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。方法　在应用一种新的模板纯化处理技术 (Microcon 10 0 )基础上 ,采用适应于检测我国马来丝虫的两套DNA扩增引物(P1、P2与P3、P4) ,对实验感染马来丝虫的中华按蚊进行扩增检测。结果　两套引物均可检出蚊体内不同发育期幼丝虫 (L1、L2 和L3) ,其灵敏度达 1只蚊体内 1/ 6 4条L1和 2 0 0只群体蚊中含有 1只感染蚊 (体内有 1条L3)的水平 ,而对犬恶丝虫及未感染蚊却不能扩增出特异条带。结论　初步建立特异、灵敏和简捷的PCR检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。

关键词: 马来丝虫, 蚊媒, DNA, PCR

Abstract: 　Objective To establish a specific, sensitive and simple assay for the detection of Brugia malayi larva in Anopheles sinensis .Methods Using a new DNA purification technique (Microcon 100) and two pairs of oligonucleotide primers (p1, p2 and p3,p4) suitable for detecting B malayi in seven areas in our country, the mosquito vectors infected by B malayi were detected by polymerase chain reaction(PCR).Results This PCR method could amplify separately a 322 basepair(bp) and a 155 bp DNA fragment and detect as few as 1/64 of one L 1 in 1 mosquito,the detectable limit was nearly 4 pg DNA of filarial larvae, and it could also detect 1 infected mosquito with one L 3 of B malayi in pools of up to 200 mosquitoes. In contrast,no such specific 322 bp or 155 bp DNA band was detected in Dilofilaria immitis and normal mosquito.Conclusion This PCR techique established for supervision of mosquito vector in B malayi endemic areas is specific,sensitive,and simple.

Key words: Brugia malayi, mosquito vector, DNA, PCR

王莹;戴晓冬;田晓光;崔昱;李杰;袁晓东;孙德建. 聚合酶链反应检测蚊体内马来丝虫幼虫的实验[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2001, 19(2): 12-106.

WANGYing;DAIXiaodong;TIANXiaoguang;CUIYu;LIJie;YUANXiaodong;SUNDejian. Studies on Detecting Brugia malayi Larva in Mosquitoes by Polymerase Chain Reaction[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2001, 19(2): 12-106.

[1]	唐琦, 吕超, 王熙, 郭苏影, 许晓娟, 朱海, 李银龙, 林伟娜, 周新杰, 冯婷, 许静, 秦志强. 3种方法检测野鼠血吸虫感染的效果评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2025, 43(2): 186-191.
[2]	巩月红, 潘美驰, 孙佳佳, 马瑞佳, 吾斯曼江·艾买提, 赵一聪, 赵军, 王建华. 去氢骆驼蓬碱联合rad51抑制剂对细粒棘球蚴体外作用及DNA损伤水平的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(6): 726-736.
[3]	陈云虹, 谢贤良, 李燕榕, 陈宝建, 林耀莹, 余文武, 余海峰. 不同地域株东方次睾吸虫线粒体nad1基因序列分析及种系发育研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(5): 668-671.
[4]	王居锋, 薛诗杰, 刘江永, 赖德华, 伦照荣. 我国多个地区麦穗鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况及其鉴定分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(4): 475-480.
[5]	郭思含, 黄新安, 徐寒黎, 李春晓, 刘康康, 邢丹, 赵腾. 尖音库蚊复合体蚊虫DNA甲基化水平分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(4): 502-511.
[6]	王真瑜, 江莉, 余晴, 张耀光, 吴寰宇, 陈健, 朱民. 《疟原虫核酸检测多重PCR法》标准解读[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2024, 42(4): 521-524.
[7]	马志雅, 谢世臣, 贺渊惠, 高文伟, 刘卿, 朱兴全, 郑文斌. 山西省绵羊捻转血矛线虫的感染现状及遗传变异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(6): 733-738.
[8]	原慧真, 李栋梁, 程书琪, 菅复春. 芽囊原虫体外培养特性的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 631-635.
[9]	徐银, 刘婷, 徐慧, 曾小军, 兰炜明, 龚志红, 戴坤教, 邱婷婷, 郝先, 谢曙英. PCR-CRISPR/Cas12a华支睾吸虫囊蚴检测方法的建立和应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 421-426.
[10]	蔡长煌, 张芝平, 卓鸣莺, 郭理平, 傅志辉, 刘亦若. 基于虫卵内转录间隔区2序列分析诊断麝猫后睾吸虫和华支睾吸虫感染[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 427-433.
[11]	黎玉琼, 于有利, 郜军荣, 刘芸芸, 李红兵, 牛晓昊. 宁夏银川地区奶牛毕氏肠微孢子虫的感染情况与基因型鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 476-479.
[12]	兰炜明, 徐慧, 徐银, 邱婷婷, 谢曙英, 邓凤林, 胡绍良, 刘欢, 郭家钢, 曾小军. 荧光定量PCR用于日本血吸虫感染高危环境早期预警的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 502-505.
[13]	陈慧林, 朱永航, 范海页, 赵薇, 刘璐瑶, 曹玉祥, 叶长江, 孙恩涛. 基于18S和28S rDNA基因的房舍甲螨DNA条形码比较研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 163-169.
[14]	李美, 肖宁, 夏志贵. 基于无性期18S rDNA特异性引物检测5种疟原虫qPCR的建立和应用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(1): 36-43.
[15]	张耀光, 江莉, 王真瑜, 朱民, 朱倩, 马晓疆, 余晴, 陈健. 2020—2021年上海市7例输入性疟疾病例误判原因分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(1): 68-74.