中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2018, Vol. 36 ›› Issue (4): 361-366.
汲蕊, 梁瑞文, 管志玉*(), 李瑞芳, 付玉荣, 王红艳
Rui JI, Rui-wen LIANG, Zhi-yu GUAN*(), Rui-fang LI, Yu-rong FU, Hong-yan WANG
摘要:
目的 探讨Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路在微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染小鼠致肠黏膜损伤中作用的分子机制。方法 30只4周龄雄性BALB/c小鼠随机分成感染1周组、感染2周组和未感染组,每组10只。感染组每鼠经口灌胃微小隐孢子虫卵囊(1×105个/只),未感染组小鼠正常饮食、饮水。感染组小鼠分别于感染后第1周和第2周剖杀,未感染组小鼠于第2周剖杀。取小鼠肠组织,HE染色观察小鼠肠黏膜的病理变化。抽提肠黏膜组织总RNA,逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TLR4和NF-κB p65的mRNA相对表达量。蛋白质印迹(Western blotting)检测肠黏膜组织中TLR4和NF-κB p65的相对表达量。ELISA检测肠黏膜组织中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。结果 HE染色结果显示,感染组小鼠肠绒毛明显萎缩变短、脱落,黏膜下层水肿,与肌层间形成明显的间隙;未感染组小鼠肠绒毛结构完整。qRT-PCR结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中TLR4的mRNA相对表达量分别为2.3 ± 0.4、3.5 ± 0.1,均高于未感染组(1.0 ± 0.0)(P < 0.05,P < 0.01);NF-κB p65的mRNA相对表达量分别为2.6 ± 0.3、3.6 ± 0.2,均高于未感染组(1.1 ± 0.1)(P < 0.05,P < 0.01)。Western blotting结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中TLR4的相对表达量分别为0.4 ± 0.0、0.6 ± 0.0,均高于未感染组(0.2 ± 0.0)(P < 0.05,P < 0.01);NF-κB p65的表达量分别为0.6 ± 0.0、0.8 ± 0.1,均高于未感染组(0.4 ± 0.0)(P < 0.05,P < 0.01)。ELISA检测结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中IL-1β的表达量分别为33.3 ± 2.2、46.1 ± 2.5,均高于未感染组(22.3 ± 5.0)(P < 0.01);TNF-α的表达量分别为45.7 ± 2.0、55.4 ± 3.6,均高于未感染组(25.7 ± 9.3)差异有统计学意义(P < 0.01)。结论 微小隐孢子虫感染小鼠后,通过激活TLR4/NF-κB信号通路,可上调TLR4和NF-κB p65的表达,促进IL-1β和TNF-α的释放,诱发肠黏膜炎症反应。
中图分类号: