高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫的初步研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫的初步研究

柯艳坤1，黄裕1，葛秀清1 *，彭梅仙1，汪清1，黄立任1，罗国强1，钟雷响1，阚式绂1，张远新1，翟建新2

1 深圳市农产品质量安全检验检测中心，深圳 518005；2 深圳澳东检验检测科技有限公司，深圳 518000

出版日期:2014-12-30 发布日期:2015-02-12

Detection of Angiostrongylus cantonensis Larvae with a High Resolution Melt PCR Assay

KE Yan-kun1，HUANG Yu1，GE Xiu-qing1 *，PENG Mei-xian1，WANG Qing1，HUANG Li-ren1，LUO Guo-qiang1，ZHONG Lei-xiang1，KAN Shi-fu1，ZHANG Yuan-xin1，ZHAI Jian-xin2

1 Inspection and Testing Centre for Agrocultural Product Quality of Shenzhen，Shenzhen 518005，China；2 Shenzhen Aodong Testing Technology Co., Ltd，Shenzhen 518000，China

Online:2014-12-30 Published:2015-02-12

摘要/Abstract

摘要：

目的利用实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。方法针对广州管圆线虫核糖体RNA基因的内转录间隔区（ITS）序列设计引物，应用实时荧光PCR和高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。并通过检测广州管圆线虫、华支睾吸虫和棘颚口线虫DNA，分析该方法的特异性；分别检测1~10条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA，分析该方法的敏感性。结果该方法能够特异性检测广州管圆线虫幼虫，检测华支睾吸虫和棘颚口线虫时未出现扩增曲线和熔解曲线峰。检测灵敏度可达到1条幼虫。结论实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫具有较好的特异性和敏感性。

关键词: 广州管圆线虫, 实时荧光PCR, 高分辨率熔解曲线

Abstract:

Objective To develop a detection method of the third-stage larvae of Angiostrongylus cantonensis by real-time PCR and high-resolution melt curve analysis. 　Methods　 A pair of specific primers was designed based on the internal transcribed spacer 1 （ITS1） region of the nuclear ribosomal DNA of A. cantonensis. The third-stage larvae of A. cantonensis were detected by real-time PCR and high-resolution melt curve analysis. The specificity of the method was analyzed by testing DNAs of A. cantonensis, Clonorchis sinensis, and Gnathostoma spinigerum. The genomic DNA were extracted from 1 to 10 third-stage larvae of A. cantonensis, respectively, and used to identify the sensitivity of the method. 　Results　 This method could specifically detect A. cantonensis and the detection limit reached to one larva. No amplification curve and melt curve were found in C. sinensis and G. spinigerum.　　Conclusion　 Real-time PCR and high-resolution melt curve analysis show good specificity and sensitivity for detecting the third-stage larvae of A. cantonensis.

Key words: , Angiostrongylus cantonensis；Real-time PCR；High-resolution melt curve

柯艳坤1，黄裕1，葛秀清1 *，彭梅仙1，汪清1，黄立任1，罗国强1，钟雷响1，阚式绂1，张远新1，翟建新2. 高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫的初步研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

KE Yan-kun1，HUANG Yu1，GE Xiu-qing1 *，PENG Mei-xian1，WANG Qing1，HUANG Li-ren1，LUO Guo-qiang1，ZHONG Lei-xiang1，KAN Shi-fu1，ZHANG Yuan-xin1，ZHAI Jian-xin2. Detection of Angiostrongylus cantonensis Larvae with a High Resolution Melt PCR Assay[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

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