中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2012, Vol. 30 ›› Issue (3): 10-214-217.
蔡燕丽,郑学礼*
CAI Yan-li,ZHENG Xue-li*
摘要: 目的 克隆白纹伊蚊(Aedes albopictus)RNA干扰通路相关AGO2和Dcr-2基因片段,并分析该蚊种不同发育阶段这2个基因片段的转录水平。 方法 根据埃及伊蚊(Ae. aegypti)AGO2和Dcr-2蛋白的氨基酸序列保守区设计简并引物,经RT-PCR从白纹伊蚊雌蚊总RNA中分别扩增AGO2和Dcr-2 cDNA,并与载体pMD18-T连接,转染大肠埃希菌(E. coli)后,筛选阳性克隆,测序并做Blastx分析。根据获得的白纹伊蚊AGO2和Dcr?鄄2基因片段设计特异性引物,采用半定量RT-PCR分析白纹伊蚊卵、Ⅰ/Ⅱ龄幼虫、Ⅲ/Ⅳ龄幼虫、蛹、雄蚊和雌蚊中这2个基因的mRNA水平。 结果 获得的AGO2和Dcr-2 cDNA片段大小分别为326 bp和491 bp,登录号分别为JQ764670和JQ764671。Blastx分析结果显示,该2个序列编码的氨基酸序列与埃及伊蚊的AGO2和白纹伊蚊的Dcr-2氨基酸序列的同源性分别为91%和98%。AGO2和Dcr-2基因在白纹伊蚊不同发育阶段中均有转录,于雌蚊中的mRNA水平最高,分别为雄蚊中mRNA的3.1倍和15.5倍,显著高于其他各阶段的mRNA水平(P<0.05)。 结论 获得了白纹伊蚊AGO2和Dcr-2基因部分cDNA片段,并发现这2个基因在雌蚊中转录水平最高。