两例输入性皮肤利什曼病的诊断与病原体鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (6): 12-461-464.

两例输入性皮肤利什曼病的诊断与病原体鉴定

杨玥涛, 张敏, 高春花, 石锋, 管立人, 汪俊云

1 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心，上海 200025；2 南京军区南京总医院皮肤科，南京 210002

出版日期:2011-12-30 发布日期:2012-09-27

Detection and Species Identification of Two Imported Cases of Cutaneous Leishmaniasis

YANG Yue-Tao, ZHANG Min, GAO Chun-Hua, SHI Feng, GUAN Li-Ren, WANG Jun-Yun

1 National Institute of Parasitic Diseases，Chinese Center for Disease Control and Prevention；Key Laboratory of Parasite and Vector Biology，MOH；WHO Collaborating Centre of Malaria，Schistosomiasis and Filariasis，Shanghai 200025，China；2 Department of Dermatology，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，PLA，Nanjing 210002，China

Online:2011-12-30 Published:2012-09-27

摘要/Abstract

摘要： 目的对两例疑似皮肤利什曼病进行病原学诊断，并应用分子生物学方法对虫种进行鉴定。方法两例皮肤病患者，分别曾在阿尔及利亚（病例1）和沙特阿拉伯（病例2）务工，表皮均有多个面积较大的溃疡。取皮损处组织涂片、染色、镜检，皮损处组织液置NNN培养基培养，查找原虫。取含利什曼原虫的培养液，离心收集原虫，用2对利什曼原虫种特异性引物ITS1?鄄ITS2和K13A?鄄K13B分别扩增利什曼原虫核糖体DNA内转录间隔区和动基体DNA的基因片段，扩增产物进行测序和Blast序列分析。结果病例1患者的皮损组织涂片镜检未查见利什曼原虫，皮损处组织液经NNN培养基培养10 d后查见前鞭毛体；病例2患者的皮损组织涂片镜检发现利什曼原虫无鞭毛体，皮损处组织液培养8 d后查见前鞭毛体。引物ITS1-ITS2从分离于2例患者的利什曼原虫均扩增出约330 bp的片段，与硕大利什曼原虫（Leishmania major）相应序列同源性均为100%；引物K13A-K13B均扩增出约120 bp的片段，与硕大利什曼原虫相应序列同源性均为96%。4个序列GenBank登录号为JF831924~JF831927。结论两例皮肤病患者均确诊为输入性皮肤利什曼病，病原体均为硕大利什曼原虫。

关键词: 输入性皮肤利什曼病, 硕大利什曼原虫, 分子生物学, 虫种鉴定

Abstract: Objective To diagnose and identify pathogen of two suspected cases of cutaneous leishmaniasis. Methods Two cases of dermatosis with several major ulcers on the skin were examined， who worked and returned from Algeria （case 1） and Saudi Arabia （case 2）， respectively. The stained smears of skin tissue from lesions were observed by microscope. Extravasate from lesions was cultured in NNN medium to search protozoan parasites， which were obtained by centrifugation. Two pairs of species-specific primers， ITS1-ITS2 and K13A-K13B， were used to amplify internal transcribed spacer of rDNA and kinetoplast DNA， respectively. The products were sequenced and analyzed by Blast. Results There were Leishmania amastigotes in the tissue smear of case 2， while none in that of case 1. Promastigotes were found in culture medium of both cases. The PCR products of ITS1-ITS2 and K13A-K13B from 2 cases were about 330 bp and 120 bp with respective homology of 100% and 96% to corresponding sequences of Leishmania major. The accession numbers of 4 sequences were JF831924-JF831927. Conclusion Two cases of dermatosis are diagnosed as imported cutaneous leishmaniasis and the pathogen is L. major.

Key words: Imported cutaneous leishmaniasis, Leishmania major, Molecular biology, Species identification

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