中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (5): 3-336.
李小波1,2,王婷婷1,马艳1,朱家勇1 *,刘漫宇1,金小宝1
LI Xiao-bo1,2,WANG Ting-ting1,MA Yan1,ZHU Jia-yong1 *,LIU Man-yu1,JIN Xiao-bao1
摘要: 目的 构建家蝇抗菌肽(攻击素, attacin)成熟肽的重组表达质粒并转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,诱导attacin表达。 方法 PCR扩增家蝇抗菌肽attacin基因成熟肽编码区,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-attacin用SacⅠ酶切线性化后,采用电转化法将其转入毕赤酵母GS115中,通过抗性、表型和PCR筛选多拷贝整合株。甲醇诱导毕赤酵母GS115/pPIC9K-attacin的表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物,采用琼脂糖孔穴扩散法检测其对大肠埃希菌K12D31的抑制作用。 结果 重组表达质粒pPIC9K-attacin构建成功,电转化获得多拷贝整合转化子毕赤酵母GS115/pPIC9K-attacin,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,在约Mr 22 000处有蛋白条带,表达产物可抑制E. coli K12D31的生长。 结论 家蝇抗菌肽attacin在巴斯德毕赤酵母中成功进行了表达。