中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (2): 2-93.
谢曙英1,2, 陈红根2, 余传信2 *, 殷旭仁2, 华万全2, 曾小军2, 梁幼生2, 高琪2
XIE Shu-ying1,2, CHEN Hong-gen2, YU Chuan-xin2 *, YIN Xu-ren2, HUA Wan-quan2,ZENG Xiao-jun2, LIANG You-sheng2, GAO Qi2
摘要: 目的 合成并表达曼氏血吸虫虫卵白介素4诱导物(IPSE)基因,并对其免疫特性进行分析。 方法 应用重叠PCR方法合成曼氏血吸虫IPSE基因,将其定向克隆至表达载体pET32a(+)的硫氧还蛋白(Trx)序列下游,构建重组表达质粒IPSE/pET32a(+)。将重组质粒转化至大肠埃希菌 BL21(DE3)中,经异丙基?鄄β?鄄D?鄄硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达Trx-IPSE融合蛋白。大量制备表达产物,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化重组Trx-IPSE融合蛋白。用大量PBS对变性融合蛋白进行透析,获得部分复性的可溶性Trx-IPSE融合蛋白。应用蛋白质印迹(Western blotting)分析其是否能被慢性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体所识别,及其与健康人血清中IgE抗体的结合能力。 结果 人工合成的IPSE基因序列与天然基因序列完全一致。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,含重组质粒的转化子细菌能表达相对分子质量(Mr)约35 700的蛋白分子,与预计Trx-IPSE融合蛋白的相对分子质量大小相符。Western blotting分析结果显示,变性的和复性的Trx-IPSE融合蛋白均能被慢性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体识别,融合蛋白Trx-IPSE能与健康人血清中IgE抗体非特异性结合。 结论 曼氏血吸虫IPSE基因合成获得成功,重组表达的IPSE具有与天然抗日本血吸虫抗体反应和与IgE非特异性结合的能力。