日本血吸虫肌球蛋白调节轻链的原核克隆表达及虫期转录特异性

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2010, Vol. 28 ›› Issue (1): 4-20.

日本血吸虫肌球蛋白调节轻链的原核克隆表达及虫期转录特异性

钱门宝，徐斌，孔娟，鞠川，冯正，胡薇*

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心，上海 200025

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-02-28 发布日期:2010-02-28

Cloning and Expression of SjMRLC and Analysis ofits Stage-specific Transcription

QIAN Men-bao，XU Bin，KONG Juan，JU Chuan，FENG Zheng，HU Wei*

National Institute of Parasitic Diseases，Chinese Centre for Disease Control and Prevention; Key Laboratory of Parasite and Vector Biology，MOH; WHO Collaborating Centre for Malaria，Schistosomiasis and Filariasis，Shanghai 200025，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-02-28 Published:2010-02-28

摘要/Abstract

摘要： 目的在原核系统中克隆表达日本血吸虫肌球蛋白调节轻链（SjMRLC）并分析其基因的虫期转录特异性。方法根据SjMRLC的核苷酸序列（GenBank登录号为AY815219）设计特异性引物，PCR扩增目的基因，并克隆入原核表达载体pGEX 4T-3；转至大肠埃希菌BL21株，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达；蛋白质印迹分析（Western blotting）鉴定表达产物；提取日本血吸虫各虫期总RNA，反转录成cDNA，PCR扩增分析SjMRLC基因的虫期转录特异性。结果构建pGEX 4T-3/SjMRLC重组质粒，测序表明插入的外源基因片段正确，诱导表达获得带有GST标签的可溶性蛋白（Mr 49 000）；虫期转录特异性分析显示该基因在日本血吸虫各个虫期均有转录，且水平一致。结论成功获得可溶性的带有GST标签的SjMRLC；SjMRLC是管家基因。

关键词: 日本血吸虫, 肌球蛋白调节轻链, 克隆, 表达, 虫期转录特异性

Abstract: Objective To clone and express Schistosoma japonicum myosin regulatory light chain （SjMRLC） in prokaryotic expression system and analyze its stage-specific transcription. Methods The recombinant plasmid was constructed with pGEX 4T-3 vector and expressed in BL21. The recombinant SjMRLC was identified through Western blotting assay. Total RNA from different stages of Schistosoma japonicum was extracted and used to detect the stage-specific transcription of SjMRLC. Results The recombinant plasmid of pGEX 4T-3/SjMRLC was constructed correctly. The recombiant protein (rSjMRLC) with GST tag was soluble. SjMRLC showed similar transcription level in all stages including sporocyst, miracidium, egg, cercaria, schistosomulum, female worm, male worm, and paired adults. Conclusion The soluble recombinant protein SjMRLC with GST tag was obtained. SjMRLC is a house-keeping gene.

Key words: Schistosoma japonicum, Myosin regulatory light chain, Clone, Expression, Stage-specific transcription

钱门宝;徐斌;孔娟;鞠川;冯正;胡薇. 日本血吸虫肌球蛋白调节轻链的原核克隆表达及虫期转录特异性[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, 28(1): 4-20.

QIANMen-bao;XUBin;KONGJuan;JUChuan;FENGZheng;HUWei*. Cloning and Expression of SjMRLC and Analysis ofits Stage-specific Transcription[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2010, 28(1): 4-20.

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