伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白类似基因的原核表达和抗体制备

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2008, Vol. 26 ›› Issue (2): 7-112.

伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白类似基因的原核表达和抗体制备

李英辉,赵亚*,刘忠湘,黄豫晓,毛张翔,薛采芳

第四军医大学病原生物学教研室，西安 710032

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-04-30 发布日期:2008-04-30
通讯作者: 赵亚

Cloning and Expression of PbTIP Analogous Gene from Plasmodium berghei ANKA and Preparation of its Polyclonal Antibody

LI Ying-hui,ZHAO Ya*,LIU Zhong-xiang,HUANG Yu-xiao,Mao Zhang-xiang,XUE Cai-fang

Department of Pathogenic Organism，the Fourth Military Medical University，Xi′an 710032，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-04-30 Published:2008-04-30
Contact: ZHAO Ya

摘要/Abstract

摘要： 目的克隆伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白（PbTIP）类似基因，原核表达PbTIP重组蛋白，并制备其抗血清。方法在GenBank中检索PbTIP类似基因序列，设计特异性引物，从伯氏疟原虫ANKA株扩增获得该基因cDNA片段，克隆入原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠埃希菌BL21（DE3）。经异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）鉴定重组蛋白。用重组蛋白GST-PbTIP包涵体免疫BALB/c小鼠，以间接荧光抗体试验(IFAT)和Western blotting鉴定产生的抗体。结果获得了纯化的重组蛋白GST-PbTIP及其相应抗体，该抗体可以识别相对分子质量（Mr）约为60 000的伯氏疟原虫感染红细胞内的PbTIP蛋白。结论获得PbTIP重组蛋白及其相应抗体。

关键词: 伯氏疟原虫, T细胞免疫调节蛋白, 原核表达

Abstract: Objective To clone and express a novel protein analogous to TIP（T cell immunomodulatory protein）of Plasmodium berghei ANKA and prepare its polyclonal antibody. Methods The PbTIP encoding nucleotide sequence was searched from the Plasmodium berghei genomic database and amplified by PCR. The gene was sub-cloned into prokaryotic expression vector pGEX4T-1 and expressed in E.coli BL2l （DE3）. After induction by IPTG， the expression of PbTIP-GST fusion protein was characterized by SDS-PAGE and Western blotting. The inclusion bodies of GST-PbTIP fusion protein were injected into BALB/c mouse. Anti-sera were identified by indirect fluorescent antibody test and western blotting. Results The PbTIP-GST fusion protein was successfully expressed in the form of inclusion bodies， by controlling the temperature and concentration of IPTG. Anti-PbTIP-GST sera were acquired with high titer. The sera specifically recognized the PbTIP with a band of 60 000 in P.berghei infected erythrocyte protein. Conclusion PbTIP/GST fusion protein and polyclonal antibody have been obtained.

Key words: TIP, Plasmodium berghei, Prokaryotic expression

李英辉;赵亚;刘忠湘;黄豫晓;毛张翔;薛采芳. 伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白类似基因的原核表达和抗体制备[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2008, 26(2): 7-112.

LIYing-hui;ZHAOYa*;LIUZhong-xiang;HUANGYu-xiao;MaoZhang-xiang;XUECai-fang. Cloning and Expression of PbTIP Analogous Gene from Plasmodium berghei ANKA and Preparation of its Polyclonal Antibody[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2008, 26(2): 7-112.

[1]	郭帅, 何彪, 高源利, 范永铃, 朱锋, 丁艳, 刘太平, 徐文岳. 鼠疟原虫感染大鼠和小鼠的种特异性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 539-545.
[2]	芦星, 王水怡, 陈林军, 刘明明, 刘雨桐, 朱慧茹, 姜冰冰, 杜少磊, 巴音查汗, 刘丹丹, 张伟. 马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 497-501.
[3]	曹天行, 刘军龙, 张志刚, 史康妍, 石苗, 关贵全, 李有全, 殷宏, 罗建勋. 环形泰勒虫重组TA04380蛋白的原核表达及ELISA的建立[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 362-368.
[4]	周岩, 陈韶红, 李浩, 程娜, 洪加林, 许学年. 卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(1): 20-26.
[5]	吴宇迪, 刘飞, 杨帆, 曹雅明. 传播阻断疫苗候选抗原Pb280在伯氏疟原虫中的表达及功能研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 710-717.
[6]	王作玲, 潘艳艳, 孙晓丹, 曹雅明. PD-1阻断对伯氏疟原虫感染小鼠免疫应答的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(4): 405-411.
[7]	杜云婷, 赵薇, 曹雅明, 徐兰. 青蒿琥酯与重组蛋白IL-33联合调控小鼠脑型疟免疫相关指标研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 139-145.
[8]	郑文琪, 冯学敏, 曹雅明, 韩艳秋, 王俊瑞. 伯氏疟原虫静息巯基氧化酶的生物信息学分析和体外酶活检测[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 159-165.
[9]	宋宏宇, 梁雨晴, 华瑞其, 史媛, 阳爱国, 郭莉, 袁东波, 谢跃, 杨光友. 细粒棘球绦虫磷酸甘油酸变位酶的表达、定位和诊断价值的初步评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 194-201.
[10]	张杰森, 张梦欣, 韩孟伊, 陈冰霞, 李勇森, 金晨曦, 齐艳伟. 伯氏疟原虫对小鼠脾B细胞和自然杀伤细胞及其表面分子的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(2): 255-258.
[11]	郑文琪, 王俊瑞, 王华, 刘飞, 罗恩杰, 曹雅明, 韩艳秋. 伯氏疟原虫推测分泌动合子蛋白7截短片段传播阻断功能的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(5): 520-525.
[12]	李润花, 关丽, 殷国荣. 刚地弓形虫滑行相关蛋白45的克隆、表达与免疫反应性检测[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(5): 563-567.
[13]	杨瑞, 熊乙丁, 郭珊珊, 廖业, 夏嫱, 郭锦锦, 杜联峰. 前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(4): 437-443.
[14]	姚嘉青，刘丛珊，薛剑，陶奕，张皓冰*. 细粒棘球蚴原头节β4微管蛋白的可溶性表达、纯化及生物信息学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(3): 6-231-237.
[15]	濮珏彪1,2，唐莉莉3，殷岑楠1，杜新月1，吴健桦1，赵蔚1，刘登宇3，王兆军1，吴琛耘1*. 华支睾吸虫钙结合蛋白Cs16的重组表达及血清诊断应用的初步评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(3): 12-275-279.