阴道毛滴虫沉默信息调节因子2同源基因的原核表达载体构建及表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2006, Vol. 24 ›› Issue (3): 21-VI.

阴道毛滴虫沉默信息调节因子2同源基因的原核表达载体构建及表达

张可浩1;黄丽霞1;傅玉才2;章家新3

1 温州医学院附属台州医院，台州 317000； 2 汕头大学医学院，汕头 515041； 3 厦门市仙岳医院，厦门361012

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-06-30 发布日期:2006-06-30
通讯作者: 傅玉才

Construction of Prokaryotic Expression Vector for Trichomonas vaginalis Silent Information Regulator 2 and Its Expression

ZHANG Ke-hao1;HUANG Li-xia1;FU Yu-cai2;ZHANG Jia-xin3

1 Taizhou Hospital of Zhejiang Province，Taizhou 317000，China; 2 Shantou University Medical College，Shantou 515041，China; 3 Xianyue Hospital，Xiamen 361012，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-06-30 Published:2006-06-30
Contact: FU Yu-cai

摘要/Abstract

摘要： 提取阴道毛滴虫（T.vaginalis）LX006细胞株传代培养细胞总RNA，RT-PCR扩增Tv-Sir2-like全长cDNA链，扩增产物连接到T-A克隆载体并转化大肠埃希菌（E.coli）JM109。提取重组克隆质粒，并用限制性内切酶EcoRⅠ和PstⅠ进行双酶切，将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-41b，并在E.coli BL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。结果显示目的基因定向克隆于原核表达质粒pET-41b获得了表达重组子，IPTG诱导该原核表达载体在E.coli BL21中表达相对分子质量（Mr）约为59 000的重组融合蛋白，表达量占菌体总蛋白量的30%。

关键词: 阴道毛滴虫, 沉默信息调控因子2, 同源基因, 基因克隆, 原核表达

Abstract: Total RNA was isolated from Trichomonas vaginalis and Tv-Sir2-like cDNA was amplified by RT-PCR and cloned into pGEM-T Easy plasmid. A fragment of Tv-Sir2-like cDNA was subcloned into the expression vector pET-41b and expressed in E.coli BL21 with induction of IPTG. The full-length of Tv-Sir2-like cDNA was cloned and sequenced. The prokaryotic expression system of pET-41b/Tv-Sir2-like was constructed. The fusion protein of Tv-Sir2-like was expressed in E.coli BL21，occupying 30% of the total bacterial protein after being induced by IPTG for 5 h. SDS-PAGE analysis showed that the fusion protein was about Mr 59 000. The recombinant protein of Tv-Sir2-like is efficiently expressed in E.coli BL21.

Key words: Trichomonas vaginalis, Sir2, homolog, Gene cloning, Prokaryotic expression

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