微小隐孢子虫卵囊DNA提取及用于PCR检测

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2005, Vol. 23 ›› Issue (4): 10-230.

微小隐孢子虫卵囊DNA提取及用于PCR检测

沈玉娟,曹建平,卢潍媛,李小红,刘海鹏,徐馀信,周晓农,汤林华,刘述先

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,上海 200025

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-08-30 发布日期:2005-08-30

Preparation of DNA from Cryptosporidium parvum Oocysts for PCR Detection

SHEN Yu-juan,CAO Jian-ping,LU Wei-yuan,LI Xiao-hong,LIU Hai-peng,XU Yu-xin,ZHOU Xiao-nong,TANG Lin-hua,LIU Shu-xian

National Institute of Parasitic Diseases,Chinese Center for Disease Control and Prevention,WHO Collaborating Center of Malaria,Schistosomiasis and Filariasis,Shanghai 200025,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-08-30 Published:2005-08-30

摘要/Abstract

摘要： 目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因序列(L16996)设计一对寡核苷酸引物,分别对3种方法制备模板进行PCR扩增分析。Chelex-100提取的DNA也用于观察PCR检测的敏感性。结果3种方法制备的微小隐孢子虫卵囊模板用于PCR检测均获得1条446 bp条带,Chelex-100提取的DNA用于PCR检测的敏感性至少达0.5个卵囊。结论3种方法提取的微小隐孢子虫卵囊DNA均可用于PCR检测,Chelex-100法是一种高效而快速的微量提取DNA方法,适用于对隐孢子虫DNA的检测。

关键词: 微小隐孢子虫, 卵囊, 脱氧核糖核酸, 分离和提纯, 螯合树脂法, 聚合酶链反应

Abstract: Objective To establish three methods of DNA extraction from Cryptosporidium parvum oocysts and test by PCR. Methods After three freeze-thaw cycles, three kinds of templates were extracted from the oocysts by Chelex-100, phenol/chloroform or genomic DNA purification system kit, and used for PCR detection. According to the sequence of a C.parvum gene (L16996), a pair of primers was designed and synthesized, and used for PCR. The sensitivity of the template by Chelex-100 method was also tested by PCR. Results One 446 bp PCR product was observed by agarose gel electrophoresis for all three kinds of templates. The PCR sensitivity by Chelex-100 extracted DNA reached for detection of a specimen containing only 1/2 oocyst. Conclusion The three kinds of extraction can all be served as templates for PCR detection of C.parvum oocysts, while Chelex-100 method is simpler, quicker and more reliable for DNA extraction of the parasite.

Key words: Cryptosporidium parvum, Oocysts, DNA, Isolation and purification, Chelex-100 method, PCR

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SHENYu-juan;CAOJian-ping;LUWei-yuan;LIXiao-hong;LIUHai-peng;XUYu-xin;ZHOUXiao-nong;TANGLin-hua;LIUShu-xian. Preparation of DNA from Cryptosporidium parvum Oocysts for PCR Detection[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2005, 23(4): 10-230.

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