旋毛虫排泄分泌蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

旋毛虫排泄分泌蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

刘英杰1，徐静2，黄红莹1，许国强1

1 河南大学医学院病原生物学教研室，开封 475003；2 河南大学附属淮河医院，开封 475001

出版日期:2015-08-30 发布日期:2015-09-10

Inhibitory Effect of the Excretory/Scretory Proteins of Trichinella spiralis on Proliferation of Human Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cell line

LIU Ying-jie1，XU Jing2，HUANG Hong-ying1，XU Guo-qiang1

1 Department of Pathogen Biology，Medical College of Henan University，Kaifeng 475003，China；
2 Huaihe Hospital Affliated to Henan University，Kaifeng 475001，China

Online:2015-08-30 Published:2015-09-10

摘要/Abstract

摘要：

采用MTT法检测旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用。AO/EB荧光染色观察与300 μg/ml排泄分泌蛋白共培养24 h的HepG2细胞的细胞核形态。用75 μg/ml排泄分泌蛋白作用HepG2细胞24 h后，流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率，免疫荧光法检测细胞cleaved-caspase 9的表达。结果显示，旋毛虫排泄分泌蛋白呈剂量依赖性抑制人肝癌HepG2细胞的增殖。300 μg/ml排泄分泌蛋白作用24 h后，HepG2细胞核固缩呈圆珠状凋亡特征。75 μg/ml排泄分泌蛋白作用细胞24 h后，细胞早期和晚期凋亡率分别为17.9%和7.3%，细胞坏死占6.6%；HepG2细胞中cleaved-caspase 9荧光强度明显高于阴性对照。

关键词: 旋毛虫, 排泄分泌蛋白, 肝癌HepG2细胞系, 凋亡

Abstract:

Human hepatocellular carcinoma HepG2 Cell line were cultured with different concentrations of excretory/secretory proteins from Trichinella spiralis， and MTT assay was used to evaluate the cell inhibition rate. After co-cultured with 300 μg/ml excretory/secretory proteins for 24 h， the HepG2 cells were observed under a fluorescence microscope with AO and EB staining. When co-cultured with 75 μg/ml excretory/secretory proteins for 24 h， the HepG2 cells were quantified by flow cytometry using Annexin V-FITC/PI stain， and the expression of cleaved-caspase 9 was detected by immunofluorescence assay. The proliferation of HepG2 cells was inhibited significantly by excretory/secretory proteins in a dosage dependant manner. Under fluorescence microscope， some HepG2 cells presented typical apoptotic morphologic changes and the cleaved-caspase 9 protein expression was higher than that of the control. The early and late apoptotic cells and necrotic ones occupied 17.9%， 7.3%， and 6.6%， respectively.

Key words: Trichinella spiralis, Excretory/secretory protein, Hepatocellular carcinoma HepG2 cell line, Apoptosis

刘英杰1，徐静2，黄红莹1，许国强1. 旋毛虫排泄分泌蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

LIU Ying-jie1，XU Jing2，HUANG Hong-ying1，XU Guo-qiang1. Inhibitory Effect of the Excretory/Scretory Proteins of Trichinella spiralis on Proliferation of Human Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cell line[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

[1]	张旭, 孙希萌. 旋毛虫感染免疫逃逸机制研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(4): 492-496.
[2]	郝会囡, 程永康, 张茹, 韩璐璐, 宋艳艳, 龙绍蓉, 刘若丹, 张玺, 王中全, 崔晶. 旋毛虫新生幼虫可溶性抗原的免疫蛋白组学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 176-182.
[3]	李佳铭, 王艺璇, 杨宁爱, 马慧慧, 兰敏, 刘春兰, 赵志军. 刚地弓形虫ROP16蛋白对MH-S细胞极化和凋亡的影响及其相关机制[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 579-586.
[4]	邵晗, 李思源, 李军. 二甲双胍对多房棘球蚴囊泡和原头节自噬及凋亡的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 43-49.
[5]	蔡子涵, 曹颖, 朱逢龙, 李倩, 和艳红, 杨毅梅. 纳米金棒标记技术应用于旋毛虫感染诊断的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(5): 652-658.
[6]	周文正, 孙俊刚, 赵喜滨, 曹力. 三维适形调强放疗对大鼠继发性股骨细粒棘球蚴感染的疗效研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 443-448.
[7]	王国英, 陈丹丹, 郑学礼, 李祥会, 张浩, 张军, 滕铁山. 旋毛虫成囊幼虫的感染性与其发育阶段的关系[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 785-788.
[8]	张雨璐, 王洋, 白雪, 唐斌, 胡晓祥, 张春玲, 刘明远, 刘晓雷. 旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫时期排泄分泌产物iTRAQ法蛋白质组学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(1): 47-53.
[9]	王国英, 李祥会. 旋毛虫肌幼虫在小鼠体内发育的实验观察[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(2): 235-237.
[10]	闫兰竹1,2，史晓萌1，祖雁文1，陈茜茜3，李星潘1，闫宝龙1，黄慧聪1*. 广州管圆线虫蛋白酶体α5基因的克隆、表达及重组蛋白对人THP-1巨噬细胞凋亡的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(3): 9-253-257.
[11]	高德俊, 常爽, 单秀梅, 范巍巍, 毛佐华. 刚地弓形虫棒状体蛋白ROP16对小鼠脑神经细胞凋亡的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(6): 570-574.
[12]	李徽徽, 贺文欣, 蔡兆根, 仇大鹏, 褚亮, 陈兴智, 方强, 夏惠, 李楠, 崔宁宁, 徐岚松, 杨小迪. 旋毛虫成虫排泄-分泌蛋白对脓毒症急性肝损伤的保护作用及机制研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(2): 99-104.
[13]	杨小迪, 李徽徽, 陶志勇, 方强, 程洋, 徐岚松, 薛仁敏, 陈勇, 夏惠, 张慧, 姜辉, 刘涛, 彭琨, 陈兴智. 两种蠕虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠腹腔渗出细胞一氧化氮产生及细胞因子分泌的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(2): 110-114.
[14]	杨小迪, 陶志勇, 程洋, 吴琦, 王小莉, 宋迪, 徐岚松, 薛仁敏, 常雪莲, 张慧, 汪瑞, 陈兴智, 方强. 旋毛虫成虫排泄分泌蛋白组分分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(1): 24-29.
[15]	王海龙*，邢佳欣，郭姗，李佳洁，刘红丽，孟晓丽，刘娟娟，赵瑞君，殷国荣. 刚地弓形虫棒状体蛋白17激活活化蛋白1 信号抑制小鼠巨噬细胞凋亡[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2016, 34(6): 10-529-533.