粉尘螨Ⅰ类变应原的cDNA克隆测序及亚克隆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2004, Vol. 22 ›› Issue (3): 13-175.

粉尘螨Ⅰ类变应原的cDNA克隆测序及亚克隆

杨庆贵,李朝品

安徽理工大学医学院,淮南 232001

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-06-30 发布日期:2004-06-30

Cloning, Sequencing and Subcloning of cDNA Coding for GroupⅠAllergen of Dermatophagoides farinae

YANG Qing-gui,LI Chao-pin

School of Medicine,Anhui University of Science & Technology,Huainan,232001,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2004-06-30 Published:2004-06-30

摘要/Abstract

摘要： 　　目的　获得粉尘螨I类变应原(Derf1)cDNA克隆及亚克隆,并进行测序。　方法　设计合成引物,从粉尘螨体内提取RNA,经逆转录聚合酶链反应(RTPCR)获得cDNA,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD18T,转化大肠埃希菌(E.coli)JM109,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序,将PCR筛检阳性重组子及pET32a(+)表达载体分别用BamHⅠ和SacⅠ双酶切,连接转化至E.coli感受态细胞JM10 9中过夜培养,挑选菌落进行酶切鉴定。　结果　从粉尘螨基因组RNA中扩增出Derf1基因,获得pET32a(+)Derf1亚克隆,酶切产物的大小与预期相符。　结论　对粉尘螨Derf1基因进行体外扩增并获得pET32a(+)Derf1亚克隆。

关键词: 粉尘螨, 抗原, cDNA, 序列分析

Abstract: 　Objective To clone,sequence and subclone the cDNA coding for group 1 allergen of Dermatophagoides farinae(Derf1). Methods The cDNA of Derf1 was amplified by RT-PCR and PCR. After purified, the gene fragment was cloned into a vector pMD-18T. The recombinant plasmid pMD-18T-Derf1 was transformed into E.coli JM109. Positive clones were screened and identified by PCR and digestion with restriction enzyme. The sequence of inserted Def1 gene fragment was also detected. Derf1 was then subcloned into the vector of pET-32a(+). Results The Derf1 gene fragment of Dermatophagoides farinae was specifically amplified from RNA by RT-PCR and PCR. The recombinant plasmid pMD-18T-Derf1 and pET-32a(+)-Derf1 was constructed and digested by Bam HⅠand SacⅠ, the size of gene fragment was 646 bp and in accordance with the expected one. Conclusion The pET-32a(+)-Def1 subcloning has been constructed successfully.

Key words: Dermatophagoides farinae, Allergen, cDNA, Sequence analysis

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