乔岩1,2,彭恒2,朱淮民2 *,严继舟1
QIAO Yan1,2, PENG Heng2, ZHU Huai-min2 *, YAN Ji-zhou1
摘要: 目的 鉴定某反复咳嗽患者痰液样本中形态学似棘阿米巴的寄生虫种属。 方法 分离患者痰液中原虫进行体外培养,显微镜观察原虫滋养体和包囊形态,并提取原虫DNA,采用阿米巴科18S rRNA通用引物Ami6F1和Ami9R、棘阿米巴属18S rRNA通用引物JDP1和JDP2、葛氏棘阿米巴(Acanthamoeba griffini)S-7 ATCC 18S rRNA全长序列引物AacGF和AacGR进行PCR扩增鉴定。以样本的18S rRNA基因为分子标志,与GenBank中各棘阿米巴序列进行同源性分析,筛选相关物种序列,采用最大似然法构建系统进化树,分析亲缘关系。 结果 镜下可见,患者痰样中的滋养体具有棘阿米巴特征性的棘状伪足凸起,并呈无规则的变形虫状;包囊为两层膜结构,内膜具有棘阿米巴特征性的星状突起。PCR检测结果显示,采用3组引物分别扩增出830、479和1 954 bp的条带,与预期片段大小一致。经BLAST比对后,3个扩增产物序列与棘阿米巴S-7 ATCC相似度分别达99%、99%、100%。系统进化树结果显示,样本棘阿米巴与引起角膜炎的卡氏棘阿米巴(A. castellanii)、多噬棘阿米巴(A. polyphaga)、柯氏棘阿米巴(A. cullbertsoni)和条脊棘阿米巴(A. rhysodes)同源性较高,分别为91.4%、99.6%、94.5%和91.8%。 结论 该呼吸道感染患者痰液样本中的寄生虫鉴定为葛氏棘阿米巴。