一种高效准确定量计数噬菌体肽库目标分子的方法

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (3): 19-236-238.

一种高效准确定量计数噬菌体肽库目标分子的方法

王可耕, 曾庆仁, 禹正杨, 曾铁兵, 刘彦

1 南华大学医学院寄生虫学教研室，衡阳 421001；2 中南大学医学细胞与分子生物学实验中心，长沙 410013；3 南华大学附属第一医院肿瘤外科，衡阳 421001；4 南华大学医学院微生物学和免疫学教研室，衡阳 421001

出版日期:2011-06-30 发布日期:2012-09-27

An Efficient and Accurate Method for Counting Target Molecules in Phage-Display Peptide Library

WANG Ke-Geng, ZENG Qing-Ren, YU Zheng-Yang, ZENG Tie-Bing, LIU Yan

1 Department of Parasitology，School of Medicine，University of South China，Hengyang 421001，China; 2 Cell and Molecular Biological Experiment Center，Xiangya School of Medicine，Central South University，Changsha 410013，China; 3 Department of Surgical Oncology，the First Affiliated Hospital of Unversity of South China，Hengyang 421001，China; 4 Department of Microbiology and Immunology，School of Medicine，University of South China，Hengyang 421001，China

Online:2011-06-30 Published:2012-09-27

摘要/Abstract

摘要： 利用双层琼脂平板法与荧光实时定量PCR （Real-time PCR）技术分别测定少量、中量和大量噬菌体的效价。结果显示，双层琼脂平板法与Real-time PCR法均可准确测定噬菌体效价。双层琼脂平板法所得符合条件的平板约为总数的1/3，需重复测定10次，每次消耗噬菌体10 μl，测得噬菌体效价的组内变异系数为4.93%～30.38%。Real-time PCR法重复测定3次即可，每次消耗噬菌体1 μl，其组内变异系数仅为0.02%～0.25%，明显低于双层琼脂平板法。提示，Real-time PCR技术可简单、迅速地测定噬菌体效价。

关键词: 噬菌体, 效价, 双层琼脂平板法, 荧光实时定量PCR

Abstract: The phage titer of samples representing the low, intermediate and high phage number was respectively determined by the double-layer agar plate （DLAP） method and real-time PCR assay. The two methods accurately measured the titer of samples. The plaques from about 1/3 double-agar layer plates could be used to determine the phage titer. The DLAP experiment should repeat 10 times with 10 μl sample each time, while the within-assay coefficient variation （CV） was 4.93%-30.38%. At the same time, the real-time PCR assay only repeated 3 times with 1 μl phage each time, while CV for within-assay ranged from 0.02% to 0.25%. Results indicated that real-time PCR is a simple and quick method for determining bacteriophage titer.

Key words: Phage, Titer, Double layer agar plate method：Real-Time PCR

王可耕, 曾庆仁, 禹正杨, 曾铁兵, 刘彦. 一种高效准确定量计数噬菌体肽库目标分子的方法[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(3): 19-236-238.

WANG Ke-Geng, ZENG Qing-Ren, YU Zheng-Yang, ZENG Tie-Bing, LIU Yan. An Efficient and Accurate Method for Counting Target Molecules in Phage-Display Peptide Library[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2011, 29(3): 19-236-238.

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