中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (4): 9-290-292.
高珺珊，吴威，侯洪烈，宫鹏涛，李建华，李赫，张国才，张西臣，杨举*
GAO Jun-shan，WU Wei, HOU Hong-lie, GONG Peng-tao, LI Jian-hua, LI He, ZHANG Guo-cai, ZHANG Xi-cheng, YANG Ju*
摘要： 目的 对犬恶丝虫酪蛋白激酶2β亚基（Csnk2b）部分基因片段进行克隆、原核表达及免疫反应性分析。 方法 根据犬恶丝虫cDNA文库中筛选出的Csnk2b部分基因片段设计引物，以含有插入Csnk2b部分基因片段的噬菌体DNA为模板，进行PCR扩增。产物亚克隆至原核表达载体，构建重组载体pGEX-4T-1-Csnk2b，双酶切鉴定。将其转入大肠埃希菌（E. coli）Rosetta（DE3）中，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达的重组蛋白，蛋白质印迹（Western blotting）以小鼠抗犬恶丝虫阳性血清为一抗，分析重组蛋白免疫反应性。 结果 Csnk2b部分基因片段PCR扩增产物约为700 bp，测序结果与cDNA文库中筛选得到的序列一致。重组表达载体pGEX-4T-1-Csnk2b双酶切鉴定正确。SDS-PAGE结果显示，IPTG诱导后重组蛋白GST-Csnk2b表达，相对分子质量（Mr）约为45 000，与预期大小一致。Western blotting分析表明，重组蛋白能被小鼠抗犬恶丝虫阳性血清识别。 结论 克隆并表达了犬恶丝虫Csnk2b重组蛋白，且该蛋白具有免疫反应性。
