抗骨桥蛋白抗体抑制肝泡型棘球蚴侵袭性生长和转移

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (6): 3-410-414.

抗骨桥蛋白抗体抑制肝泡型棘球蚴侵袭性生长和转移

张示杰, 张龙, 赵江桥, 张永国, 吴向未, 彭心宇, 曹玉文, 杨宏强, 吕海龙, 孙红, 陈孝平

1 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心，武汉 430030；2 石河子大学医学院第一附属医院肝胆外科，石河子 832008；3 石河子大学医学院病理科，石河子 832008

出版日期:2011-12-30 发布日期:2012-09-27

Inhibition of Invasive Growth and Metastasis of Hepatic Alveolar Echinococcosis by Anti-Osteopontin Antibody

ZHANG Shi-Jie, ZHANG Long, ZAO Jiang-Qiao, ZHANG Yong-Guo, WU Xiang-Wei, PENG Xin-Yu, CAO Yu-Wen, YANG Hong-Jiang, LV Hai-Long, SUN Gong, CHEN Xiao-Beng

1 Center of Hepatic Surgery，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China； 2 Department of Hepatobiliary Surgery，The First Affiliated Hospital，Medical College of Shihezi University，Shihezi 832008，China； 3 Department of Pathology，Medical College of Shihezi University，Shihezi 832008，China

Online:2011-12-30 Published:2012-09-27

摘要/Abstract

摘要： 目的外源性给予抗骨桥蛋白（osteopontin，OPN）抗体，观察其对肝泡型棘球蚴生长和转移的抑制作用。方法采用开腹直视下肝脏穿刺接种泡型棘球蚴组织混悬液的方法（0.1 ml/只，约含原头节400个），建立肝泡型棘球蚴沙鼠模型180只，随机分为3组。实验组和对照组于接种后当天经尾静脉分别注射0.15 ml抗OPN抗体（效价1 ∶ 32）和沙鼠注射用的兔血清，共注射17次，前7次每次间隔2 d，后10次每次间隔1周。模型组未作处理。上述3组沙鼠分别于感染后1、20、40、60、80和100 d随机各处死10只沙鼠，观察泡型棘球蚴的生长和转移情况，采用免疫组织化学SP法观察各组沙鼠肝泡型棘球蚴组织中OPN的表达情况。于感染后100 d乙醚轻度麻醉沙鼠后，摘眼球取血，分离血清，用ELISA测定沙鼠血清中OPN的含量。结果感染后1、20、40、60和80 d，实验组与对照组和模型组囊湿重、胸腔淋巴结转移率间的差异均无统计学意义（P＞0.05）。感染后100 d，实验组囊湿重、胸腔淋巴结转移率［（7.28±0.38） g、20%］均低于对照组［（9.70±0.61） g、70%］和模型组［（9.32±0.73） g、70%］（P＜0.05）。免疫组化SP法结果显示，在肝泡型棘球蚴组织中有OPN不同程度的表达，均定位于细胞浆，呈黄色、棕黄色或棕褐色，主要分布在肝泡型棘球蚴纤维囊壁的生发层。感染后1、20、40、60和80 d，实验组与对照组和模型组比较，骨桥蛋白在肝泡型棘球蚴组织中的阳性表达率间的差异无统计学意义（P＞0.05）。感染后100 d，实验组骨桥蛋白在肝泡型棘球蚴组织中的阳性表达率（20%）明显低于对照组（80%）和模型组（80%）（P＜0.05），且实验组血清中OPN含量［（30.90±2.25） ng/μl］显著低于对照组［(41.03±2.76） ng/μl］和模型组［（42.39±2.85） ng/μl］（P＜0.05）。结论抗OPN抗体可以降低沙鼠肝泡型棘球蚴组织和血清中OPN的水平，阻断OPN的功能，可抑制泡型棘球蚴的侵袭性生长和转移。

关键词: 抗骨桥蛋白抗体, 泡型棘球蚴, 侵袭性生长, 转移

Abstract: Objective To observe the inhibitive effect on invasive growth and metastasis of Echinococcus multolocularis by exogenous anti-osteopontin（OPN）antibody. Methods 180 gerbils were infected with 20% E. multolocularis suspension（approximately 400 protoscoleces in 0.1 ml per gerbil）through abdominal opening injection in liver，and then divided into model group，experiment group and control group. Experiment group and control group each with 60 gerbils were injected via the tail vein with 0.15 ml of anti-OPN antibody（1 ∶ 32）and rabbit serum，respectively. All gerbils in the two groups received injections，with 2-day interval for the first seven injections，and then at 7-day interval for the remaining injections. Model group were without any treatment. The three groups were subdivided into six groups each with 10 gerbils. The gerbils from each group were sacrificed on day 1，20，40，60，80，and 100 after infection，respectively. Hepatic echinococcus cyst and metastasis tissue were observed. The expression of OPN was measured by immunohistochemistry staining（SP method）. Serum samples were collected at 100 d post-infection, and the content of OPN in sera was measured by ELISA. Results There were no significant difference in cyst weight and metastatic rate of thoracic lymph node among the three groups at 1，20，40，60，and 80 d post-infection（P＞0.05），while at 100 d post-infection，cyst weight and metastatic rate of thoracic lymph node in experiment group［（7.28±0.38） g，20%］were lower than that of control group［（9.70±0.61） g，70%］and model group［（9.32±0.73） g，70%］（P＜0.05）. Expression of OPN was found at different levels in echinococcus cysts. OPN was located in the cytoplasm, and mainly distributed in the germinal layer. The OPN positive expression levels were not significantly different between experiment group and other groups on day 1，20，40，60，and 80 afer infection（P＞0.05）. At 100 d post-infection，OPN positive expression rate and serum OPN content in experimental group［20% and（30.90±2.25） ng/μl， respectively］was lower than that of control group［80% and （41.03±2.76） ng/μl］and model group［80% and （42.39±2.85） ng/μl］（P＜0.05）. Conclusion Anti-osteopontin antibody can reduce OPN concentration in hepatic echinococcus cyst and serum，and inhibit the invasive growth and metastasis of E. multolocularis.

Key words: Anti-osteopontin antibody, Alveolar echinococcosis, Invasive growth, Metastasis

张示杰, 张龙, 赵江桥, 张永国, 吴向未, 彭心宇, 曹玉文, 杨宏强, 吕海龙, 孙红, 陈孝平. 抗骨桥蛋白抗体抑制肝泡型棘球蚴侵袭性生长和转移[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(6): 3-410-414.

ZHANG Shi-Jie, ZHANG Long, ZAO Jiang-Qiao, ZHANG Yong-Guo, WU Xiang-Wei, PENG Xin-Yu, CAO Yu-Wen, YANG Hong-Jiang, LV Hai-Long, SUN Gong, CHEN Xiao-Beng. Inhibition of Invasive Growth and Metastasis of Hepatic Alveolar Echinococcosis by Anti-Osteopontin Antibody[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2011, 29(6): 3-410-414.

[1]	严积灿, 于文昊, 侯立朝, 张灵强, 许晓磊, 王海久, 卢倩, 樊海宁. 高龄腹腔-皮下细粒棘球蚴病诊疗1例报告[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 132-135.
[2]	杨海成, 张宏伟, 史康杰, 温钰鹏, 刘诗文, 张永国, 褚志强, 张示杰. 自分泌骨桥蛋白通过EGFR信号通路促进多房棘球蚴生长和转移的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 226-232.
[3]	徐玉梅, 曹士德, 朱传刚, 张世清. 日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶抗原表位与霍乱毒素B亚基融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞的表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(3): 364-367.
[4]	茅光耀, 周鸿让, 黄芸, 岳志远, 段磊, 许秋利, 郭云海, 党志胜, 张仪, 肖宁. Cu²⁺胁迫下福寿螺谷胱甘肽S转移酶基因表达分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2019, 37(2): 213-218.
[5]	柳建发1，李健2，任怡静3，张瑞祥2，方芳3，胡薇2,4*. 过继转移RNA干扰日本血吸虫的发育表型评价技术的建立[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2018, 36(3): 10-258-265.
[6]	敬保迁, 谢勇恩, 胡为民, 杨健, 王朝莉, 冯莉. 重组杜氏利什曼原虫Pxn1、TryP、假定蛋白CAJ07026和GDPMP蛋白刺激BALB/c小鼠的免疫应答状态[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2017, 35(6): 563-569.
[7]	丁忆晗1，周瑞2，杨小迪1*，张莉莉1. 过继转移在蠕虫调控过敏性和自身免疫性疾病的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2015, 33(4): 11-290-294.
[8]	闻晓波，冉旭华*，王春仁，宋佰芬，魏晓曼，李晓娟，王密，苗艳. 肝片形吸虫重组谷胱甘肽?鄄S?鄄转移酶对 SD大鼠的免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2013, 31(1): 10-46-48,53.
[9]	杨宏强1,2，马少波1，卞志远1，李江1，邹泓3，张示杰1,2，彭心宇1,2 ，陈孝平2 *. 肿瘤坏死因子-α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在肝泡型棘球蚴周围单核细胞中的表达[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2012, 30(3): 7-201-205.
[10]	孔娟, 冯正, 徐斌, 邓王平, 杨忠, 胡薇. 日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因的克隆、表达及虫期表达差异分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(3): 4-179-182.
[11]	张龙1, 张示杰1 *, 曹玉文2, 吴向未1, 彭心宇1, 杨宏强1, 孙红1. 骨桥蛋白与肝泡型棘球蚴转移的相关性研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(1): 8-33-36.
[12]	唐群科, 张瑛, 李永寿, 袁春萍, 张冬天. 肝泡型棘球蚴病非手术治疗的疗效评价[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, 29(1): 11-46-48.
[13]	朱艳红;韩庆霞;任伟;牛安欧;李柳哲. 日本血吸虫Sj23DNA疫苗的增效研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2006, 24(6): 8-440.
[14]	肖景莹;张冬梅;蔡连顺;沈璐辉;潘卫庆. 恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT免疫原性及免疫保护作用的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2006, 24(3): 8-195.
[15]	余光清;刘文琪;雷家慧;莫红梅;程喻力;李雍龙. 日本血吸虫Mr 26000 GSTDNA疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫的保护作用研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2006, 24(1): 12-55.