微小隐孢子虫感染犬肾细胞模型的建立及生长发育过程的研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2009, Vol. 27 ›› Issue (3): 7-222.

微小隐孢子虫感染犬肾细胞模型的建立及生长发育过程的研究

陈甫^{1, 2}, 黄克和¹ *

1 南京农业大学动物医学院, 南京 210095； 2 青岛农业大学动物科技学院, 青岛 266109

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-06-30 发布日期:2009-06-30
通讯作者: 黄克和

In vitro Cultivation Model of Cryptosporidium parvum in MDCK Cells and its Development

CHEN Fu^{1, 2}, HUANG Ke-he¹ *

1 College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China；2 College of Animal Science and Veterinary Medicine, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-06-30 Published:2009-06-30
Contact: HUANG Ke-he

摘要/Abstract

摘要： 目的建立微小隐孢子虫体外感染犬肾细胞（MDCK细胞）模型, 并观察其生长发育过程。方法利用MDCK细胞为隐孢子虫感染对象, 优化隐孢子虫感染MDCK细胞的培养条件, 观察隐孢子虫在MDCK细胞中的生长发育过程。将体外感染48 h的细胞培养上清接种小鼠, 观察其感染情况。结果在含有5%胎牛血清的DMEM培养基中, 用1×10⁵隐孢子虫卵囊感染2.0×10⁵个MDCK细胞, 培养12 h为最佳培养条件。在感染后72 h内, 隐孢子虫出现连续发育阶段, 包括脱囊、子孢子、裂殖子、裂殖体、滋养体、配子体、合子、薄壁卵囊和厚壁卵囊, 在60～72 h内形成卵囊；用感染48 h的细胞培养上清接种于免疫抑制小鼠, 10 d后有隐孢子虫卵囊排出。结论建立了能稳定用于微小隐孢子虫体外感染的MDCK细胞模型, 观察到隐孢子虫的生长发育全过程。

关键词: 微小隐孢子虫, 感染模型, MDCK细胞, 培养

Abstract:

Objective To develop an in vitro culture system for Cryptosporidium parvum in Madin-Darby canine kidney （MDCK） cell and observe its life cycle （from desquamate to oocyst）. Methods Oocysts of C. parvum were co-cultured with MDCK cells in vitro. Culture condition was optimized and the life cycle of

C. parvum investigated. Results The optimal culture conditions for C. parvum in MDCK cells were 2.0×10⁵ cells cultured for 12 h, and infected by 1.0×10⁵ oocysts in the Dulbecco′s Modified Eagle Medium with 5% FBS. Following ７2 h co-culture, desquamate, sporozoites, trophozoites, meronts, microgametocytes, macrogametocytes, zygote, thin-wall oocyst, and thick-wall oocyst appeared orderly. Between the 60th and 72th hour, many oocysts emerged. Inoculated by the C. parvum-infected cell culture supernatant at the 48th hour, the immunosuppressed mice became infected. Conclusion The culture system provides a model for propagation of the parasites and demonstrates a complete in vitro life cycle of C. parvum.

Key words: Cryptosporidium parvum, Infection model, MDCK cell, Culture

陈甫;;黄克和. 微小隐孢子虫感染犬肾细胞模型的建立及生长发育过程的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009, 27(3): 7-222.

CHENFu;;HUANGKe-he*. In vitro Cultivation Model of Cryptosporidium parvum in MDCK Cells and its Development[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2009, 27(3): 7-222.

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