马来丝虫肌球蛋白部分编码基因Bm-M55的克隆与真核表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2008, Vol. 26 ›› Issue (6): 22-484.

马来丝虫肌球蛋白部分编码基因Bm-M55的克隆与真核表达

谢东方,方政*,黄为群,沈勤,童海燕,徐邦生

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-12-30 发布日期:2008-12-30

Cloning and Eukaryotic Expression of the Gene Encoding Myosin from Brugia malayi

XIE Dong-fang， FANG Zheng， HUANG Wei-qun，SHEN Qin， TONG Hai-yan， XU Bang-sheng

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-12-30 Published:2008-12-30

摘要/Abstract

摘要： 根据马来丝虫肌球蛋白部分编码基因（Bm-M55）序列设计引物，以其微丝蚴总RNA为模板，反转录PCR扩增目的基因。用TA克隆方法将目的基因克隆至载体pGEM?鄄T Easy中，经PCR和双酶切鉴定并测序后，亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1（+），构建真核表达载体pcDNA3.1（+）/Bm-M55，转染COS-7细胞后进行RT-PCR验证。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）对获得重组蛋白Bm?鄄M55进行分析和鉴定。RT-PCR鉴定结果显示，转染的COS-7细胞表达了Bm-M55基因，根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank（登录号为AAA27858）中的一致，重组蛋白Bm-M55相对分子质量（Mr）约为 55 000。

关键词: 马来丝虫, 肌球蛋白, 真核表达载体, COS-7 细胞

Abstract: Total RNA was extracted from periodic microfilariae of Brugia malayi and its myosin partial gene （Bm-M55） was amplified by RT-PCR. The PCR product was cloned and then subcloned into pcDNA3.1（+）vector. The recombinant eukaryotic plasmids were screened and identified by digestion with restriction enzyme and PCR amplification, and was transfected into COS-7 cells subsequently. The expressed protein was identified by SDS-PAGE. Bm-M55 mRNA was highly expressed in transfected COS-7 cells. The deduced amino acid sequence showed to be identical with that of Bm-M55, and the recombinant protein was about Mr 55 000.

Key words: Brugia malayi, Myosin, Eukaryotic expressing vector, COS-7 cell

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