目的 研究氧化苦参碱(OMT)对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染小鼠肠黏膜Toll样受体2(TLR2)和TLR4的调节作用,探讨OMT治疗隐孢子虫病的分子机制。方法 30只雄性健康BALB/c小鼠随机分为感染组、感染后OMT治疗组(简称OMT治疗组)和未感染组,每组10只。感染组和OMT治疗组小鼠经口灌胃微小隐孢子虫卵囊(1 × 105个/只),建立微小隐孢子虫肠道感染小鼠模型,未感染组小鼠正常饮食、饮水。OMT治疗组小鼠建模成功后经口灌胃OMT (50 mg/kg),每日1次,连续2周。采用金胺酚-改良抗酸染色法镜检计数小鼠克粪便卵囊数。治疗2周后剖杀各组小鼠,HE染色镜下观察小鼠肠黏膜的病理改变,测量肠绒毛高度、隐窝深度。抽提小鼠肠黏膜组织总RNA,逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TLR2和TLR4的mRNA相对表达量。蛋白质印迹(Western blotting)检测小鼠肠黏膜组织中TLR2和TLR4的相对表达量。结果 金胺酚-改良抗酸染色镜检结果显示,感染组小鼠克粪便卵囊数自建模成功后逐渐增加,至第7天达到最高,为(179.24 ± 21.12)个/克,感染强度为4级,然后趋于平衡。OMT治疗组小鼠克粪便卵囊数在治疗第5天开始下降,治疗2周后,感染强度趋近于0级。HE染色镜下观察结果显示,感染组小鼠肠绒毛明显萎缩变短、脱落,黏膜下层结构严重水肿,与肌层间形成明显的间隙;OMT治疗组小鼠肠绒毛基本修复,结构趋于完整,排列趋于整齐;未感染组小鼠肠绒毛结构完整。OMT治疗组小鼠肠绒毛高度为(346.1 ± 19.2)μm,高于感染组[(278.0 ± 52.9)μm](P < 0.01),与未感染组[(348.1 ± 18.2)μm]差异无统计学意义(P > 0.05);隐窝深度为(155.4 ± 5.3)μm,低于感染组[(173.1 ± 11.1)μm](P < 0.05),与未感染组[(149.9 ± 27.4)μm]差异无统计学意义(P > 0.05);绒毛高度/隐窝深度为2.2 ± 0.2,高于感染组(1.6 ± 0.3)(P < 0.01),与未感染组(2.4 ± 0.6)差异无统计学意义(P > 0.05)。qRT-PCR结果显示,OMT治疗组小鼠肠黏膜组织中TLR2 mRNA的相对表达量为1.4 ± 0.3,低于感染组(3.0 ± 0.1)(P < 0.01),与未感染组(1.0 ± 0.0)差异无统计学意义(P > 0.05);TLR4 mRNA的相对表达量为1.5 ± 0.1,低于感染组(3.1 ± 0.3)(P < 0.01),与未感染组(1.0 ± 0.0)差异无统计学意义(P > 0.05)。Western blotting检测结果显示,OMT治疗组小鼠肠黏膜组织中TLR2的相对表达量为0.2 ± 0.0,低于感染组(0.6 ± 0.1)(P < 0.01),与未感染组(0.2 ± 0.1)差异无统计学意义(P > 0.05);TLR4的相对表达量为0.3 ± 0.1,低于感染组(0.6 ± 0.0)(P < 0.01),与未感染组(0.2 ± 0.1)差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 OMT可通过下调微小隐孢子虫感染小鼠肠黏膜组织中TLR2和TLR4的表达,可促进小鼠受损肠黏膜的修复。