%0 Journal Article %A 张苏阳 %A 邢云天 %A 袁轩 %A 曲国立 %A 姚甲凯 %A 戴建荣 %T 氯硝柳胺对光滑双脐螺氧化磷酸化的影响 %D 2022 %R 10.12140/j.issn.1000-7423.2022.01.009 %J 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 %P 61-67 %V 40 %N 1 %X

目的 研究氯硝柳胺对光滑双脐螺氧化磷酸化的影响,探讨氯硝柳胺的杀螺机制。 方法 用线粒体提取试剂盒提取光滑双脐螺成螺线粒体,考马斯蓝染色法检测提取线粒体蛋白含量,用线粒体复合体Ⅳ活性检测试剂盒检测提取过程中组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中复合体Ⅳ活性以评价提取线粒体的纯度。用线粒体复合物活性检测试剂盒提取光滑双脐螺的线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ,每种复合物各分成0.2 μg/ml、1.0 μg/ml组和二甲基亚砜(DMSO)组,分别加入终浓度为0.2和1.0 μg/ml的氯硝柳胺、0.5% DMSO,分别测定不同波长处的吸光度(A值),计算复合体的活力值。在96孔板中每孔加入蛋白浓度为33 μg/ml的线粒体悬液,分别加入终浓度为0.2和1.0 μg/ml的氯硝柳胺(0.2 μg/ml组和1.0 μg/ml组)或0.5% DMSO(DMSO组),测定25 ℃条件下10、20、30 min的A520值,计算线粒体膜通透性转运孔(mPTP)开放度。在96孔板中每孔加入含终浓度为5 μg/ml的JC-1染料、蛋白浓度为0.1 mg/ml的线粒体悬液,0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μg/ml组分别加入终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 μg/ml的氯硝柳胺,氰化羰基-3-氯苯腙(CCCP)组加入20 μg/ml的CCCP作阳性对照组,DMSO组加入0.5%的DMSO作阴性对照组,在激发光485 nm、发射光590 nm、25 ℃条件下连续检测荧光强度30 min。组间比较采用单因素方差分析。 结果 提取获得的线粒体总蛋白浓度为(4.24 ± 0.11)mg/ml, 组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中电子传递链复合物Ⅳ活性分别为(14.88 ± 1.80)、(5.60 ± 0.96)、(24.19 ± 3.53)U/mg,3组间差异有统计学意义(F = 46.922,P < 0.01)。0.2 μg/ml组、1.0 μg/ml组与DMSO组的复合物Ⅰ活性分别为(523.98 ± 120.37)、(559.74 ± 238.48)、(796.64 ± 218.79)U/mg;复合物Ⅱ各组活性分别为(3.70 ± 0.36)、(3.54 ± 1.90)、(5.47 ± 2.18)U/mg;复合物Ⅲ各组活性分别为(6.03 ± 0.79)、(5.01 ± 0.80)、(5.82 ± 0.69)U/mg;复合物Ⅳ各组活性分别为(31.20 ± 3.99)、(32.08 ± 3.20)、(30.82 ± 4.21)U/mg;复合体Ⅴ各组活性分别为(22.38 ± 3.83)、(23.08 ± 6.50)、(25.84 ± 6.86)U/mg。0.2 μg/ml组、1.0 μg/ml组线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性与DMSO组差异均无统计学意义(F = 1.658、1.215、1.181、0.138、0.298,P > 0.05)。加入氯硝柳胺10 min时,0.2 μg/ml组、1.0 μg/ml组和DMSO组mPTP开放度分别为(0.040 ± 0.005)、(0.041 ± 0.002)、(0.039 ± 0.036);加入20 min时分别为(0.069 ± 0.008)、(0.067 ± 0.002)、(0.065 ± 0.015);加入30 min时分别为(0.090 ± 0.009)、(0.088 ± 0.002)、(0.087 ± 0.012)。加入氯硝柳胺10、20、30 min,0.2 μg/ml组、1.0 μg/ml组与DMSO组mPTP开放度差异均无统计学意义(F = 0.025、0.094、0.060,P > 0.05)。相对于DMSO组(1.000),在加入氯硝柳胺15 min时0.6、0.8和1.0 μg/ml组的线粒体膜电位分别为(0.874 ± 0.008)、(0.843 ± 0.018)、(0.773 ± 0.027),均低于DMSO组(F = 44.285,P < 0.05);加入30 min时,0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 μg/ml组的线粒体膜电位分别为(0.951 ± 0.051)、(0.886 ± 0.022)、(0.766 ± 0.019)、(0.746 ± 0.016)、(0.675 ± 0.021),除0.2 μg/ml组,其余各组均低于DMSO组(F = 125.738,P < 0.01)。 结论 浓度低于1.0 μg/ml的氯硝柳胺对光滑双脐螺线粒体电子传递链复合物活性无影响,也未造成线粒体膜通透性转运孔的开放,但可引起光滑双脐螺线粒体膜电位的剧烈下降,影响光滑双脐螺的氧化磷酸化过程。

%U https://www.jsczz.cn/CN/10.12140/j.issn.1000-7423.2022.01.009