张少华，骆学农，李雪强，才学鹏*
ZHANG Shao-hua, LUO Xue-nong, LI Xue-qiang, CAI Xue-peng*
摘要：
目的 克隆豆状带绦虫（Taenia pisiformis）肌动蛋白基因（Tp-actin）全长cDNA，分析其基因结构、系统进化及作为内参基因的适用性。 方法 采用RT-PCR法扩增Tp-actin基因片段，RACE-PCR法获得3′和5′端cDNA序列，分别测序后拼接Tp-actin全长cDNA。利用生物信息学软件进行基因结构和系统进化分析。应用Primer Express软件设计Tp-actin和豆状带绦虫组织蛋白酶L样半胱氨酸蛋白酶基因（TpCP）的特异性引物，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测引物特异性和Tp-actin基因扩增效率，并以Tp-actin作为内参基因，分析TpCP在豆状带绦虫六钩蚴、囊尾蚴、成熟节片和孕节片等不同发育阶段组织中的表达特征。 结果 测序结果显示，Tp-actin基因片段为1 048 bp，3′和5′端基因片段分别为428和945 bp，与预期结果一致。拼接获得的Tp-actin全长cDNA为1 279 bp，其中3′UTR长118 bp，5′UTR长30 bp，开放阅读框为1 131 bp，序列已提交GenBank（登录号为JX624787）。生物信息学分析结果显示，该序列编码376个氨基酸，推测蛋白相对分子质量（Mr）为41 749，等电点为5.29，含6种特定功能位点和3个actin蛋白家族特征位点。系统进化分析显示，Tp-actin序列与猪带绦虫（Taenia solium）和枝形裂头绦虫（Diphyllobothrium dendriticum）的同源性分别为100%和99.7%。qRT-PCR结果显示，Tp-actin和TpCP基因经特异性引物扩增，分别获得82和108 bp片段，与预期结果一致；Tp-actin和TpCP基因熔解曲线均呈单一信号峰，引物特异性强；Tp-actin基因标准曲线线性相关系数（R2）为0.999，符合qRT-PCR对扩增效率的要求；以Tp-actin基因为内参基因，TpCP基因在孕卵节片中相对转录水平比值为1.65，显著高于六钩蚴（1.00）、成熟节片（0.87）和囊尾蚴（0.62）（P<0.05）。 结论 Tp-actin基因高度保守，可作为豆状带绦虫基因表达调控及量化分析的内标参照。
