藏羊源细粒棘球蚴抗原B8/2基因的克隆表达和免疫学鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

藏羊源细粒棘球蚴抗原B8/2基因的克隆表达和免疫学鉴定

朵红1，李伟1，付永1，彭毛1，郭志宏1，沈秀英1，牛建章1，尼玛2，童延军3，河生德2，俄日姐3，炊文婷4，胡保平4

1青海省畜牧兽医科学院，青海 810016；2 青海省海晏县兽医站，海晏 812200；3 青海省兴海县兽医站，兴海 813300；4 青海大学，青海 810016

出版日期:2016-02-28 发布日期:2016-03-11

Cloning and Expression of Tibetan Sheep-origin Echinococcus granulosus Antigen B Gene and Protein Identification#br# Using Immunological Method

DUO Hong1, LI Wei1, FU Yong1, PENG Mao1, GUO Zhi-hong1，SHEN Xiu-ying1, #br# NIU Jian-zhang1, NI Ma2, TONG Yan-jun3, HE Sheng-de2, E Ri-jie3,#br# CHUI Wen-ting4, HU Bao-ping4

1 Qinghai Academy of Animal Science and Veterinary Science, Qinghai 810016, China；2 Haiyan County Veterinary Station of Qinghai Province, Haiyan 812200, China；3 Xinghai County Veterinary Station of Qinghai Province, Xinghai 813300, China；4 Qinghai University, Qinghai 810016, China

Online:2016-02-28 Published:2016-03-11

摘要/Abstract

摘要：

目的克隆、表达青海省藏羊源细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）抗原B8/2（EgAgB8/2）基因，并进行免疫学鉴定。方法用RT-PCR扩增EgAgB8/2基因cDNA，构建原核表达载体pET-EgAgB8/2，转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）对诱导表达后的蛋白进行鉴定。结果克隆的EgAgB8/2基因长335 bp，序列分析表明与已报道的EgAgB8/2 cDNA序列的同源性为98%～100%，原核表达载体pET-EgAgB8/2构建正确。诱导表达后，通过SDS-PAGE检测，上清中有大量目的蛋白表达。纯化的蛋白经Western blotting鉴定为目的蛋白。结论成功克隆了青海省藏羊源EgAgB8/2基因，构建了原核表达载体，诱导表达后的蛋白为目的蛋白。

关键词: 细粒棘球蚴, 抗原B8/2基因, 克隆表达, 免疫学鉴定

Abstract:

Objective To clone and express the Tibetan Sheep-origin Echinococcus granulosus Antigen B8/2 Gene, and immunologically identify the encoded protein. Methods The cDNA of EgAgB8/2 gene was amplified by RT-PCR. The prokaryotic expression vector pET-EgAgB8/2 was constructed and transformed into E. coli BL21（DE3） for expression. Proteins were extracted, separated in SDS-PAGE and identified by Western blotting. Results The cloned EgAgB8/2 gene was 335 bp in length, and had a 98%-100% sequence homology with the reported cDNA sequence of EgAgB8/2, indicating the successful construction of the pET-EgAgB8/2 vector. SDS-PAGE revealed large amount of proteins in supernatant. Western blotting further confirmed the expression of the target protein. Conclusion The EgAgB8/2 gene of Tibetan Sheep-origin in Qinghai is successfully cloned, and the constructed pET-EgAgB8/2 vector can be used to express the target protein.

Key words: Echinococcus granulosus, AgB8/2 gene, Gene cloning, Prokaryotic expression

朵红1，李伟1，付永1，彭毛1，郭志宏1，沈秀英1，牛建章1，尼玛2，童延军3，河生德2，俄日姐3，炊文婷4，胡保平4. 藏羊源细粒棘球蚴抗原B8/2基因的克隆表达和免疫学鉴定[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.

DUO Hong1, LI Wei1, FU Yong1, PENG Mao1, GUO Zhi-hong1，SHEN Xiu-ying1, . Cloning and Expression of Tibetan Sheep-origin Echinococcus granulosus Antigen B Gene and Protein Identification#br# Using Immunological Method[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases.

[1]	逯君霞, 许军英, 赵彬, 王芊文, 李文华, 耿玉庆, 侯隽, 吴向未, 陈雪玲. 细粒棘球蚴感染诱导巨噬细胞表达CD73和A2AR抑制炎症反应[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(5): 559-566.
[2]	蒉嫣, 薛垂召, 王旭, 刘白雪, 王莹, 王立英, 杨诗杰, 韩帅, 伍卫平, 肖宁. 2021年全国棘球蚴病防治进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 142-148.
[3]	郭刚, 任远, 焦红杰, 武娟, 郭宝平, 齐文静, 李军, 张文宝. 腹腔感染棘球蚴微囊对小鼠肝脏多房棘球蚴感染及致病的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 156-162.
[4]	路伟民, 杨小涛, 朱瑛, 张鸿, 李霁伟, 王艳春. 儿童肺细粒棘球蚴病1例[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(2): 253-256.
[5]	郭璐, 吴小霞, 段兰利, 王冰洁, 徐宁, 阿热艾·阿哈太, 乌云花, 赵莉, 班万里, 陈云英, 余婉蓉, 刘帅, 潘星羽, 吾力江·卡马力, 徐晶, 穆尼拉·特列吾汗, 张壮志. 新疆部分地区牛、羊细粒棘球蚴感染情况调查及基因多态性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 603-609.
[6]	毋德芳, 付永, 任宾, 张耀刚, 许晓磊, 庞明泉, 樊海宁. 青海人源两型棘球绦虫（棘球蚴）遗传多样性及分化时间研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(5): 610-615.
[7]	侯娇, 温浩, 王明坤, 蒋铁民, 房彬彬, 李静, 张传山, 王慧. 肝细粒棘球蚴病手术患者病灶活性状态的影响因素分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 309-314.
[8]	乔世源, 周雪, 刘程豪, 姜慧娇, 卜媛媛, 陈雪玲, 吴向未. 阿苯达唑载药囊泡对细粒棘球蚴原头节活性的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(3): 324-329.
[9]	严积灿, 于文昊, 侯立朝, 张灵强, 许晓磊, 王海久, 卢倩, 樊海宁. 高龄腹腔-皮下细粒棘球蚴病诊疗1例报告[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 132-135.
[10]	朱江, 黄海军, 张望, 梅虎, 朱时雨, 宋思凯, 张军. 合并囊内胆漏的肝细粒棘球蚴病患者手术方式的分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(1): 50-55.
[11]	马文梅, 桑伟, 艾麦提·牙森, 佐力克, 付莉, 苗娜. 核因子-κB/髓样分化分子88在细粒棘球蚴病患者肝纤维化中的作用[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(6): 779-783.
[12]	周文正, 孙俊刚, 赵喜滨, 曹力. 三维适形调强放疗对大鼠继发性股骨细粒棘球蚴感染的疗效研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(4): 443-448.
[13]	黄燕, 喻文杰, 尚婧晔, 何伟, 张光葭, 王奇, 杨柳, 廖沙, 李汭芮, 姚人新, 曾明才, 张福斌, 李树成, 刘阳, 钟波, 王谦. 阿苯达唑和吡喹酮交替联合用药治疗藏族牧民棘球蚴病的效果观察[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2021, 39(2): 171-177.
[14]	史春丽, 杨慧, 潘雯, 张馨, 朱晓庭, 赵嘉庆. 细粒棘球蚴原头节分泌的细胞外囊泡中人源蛋白质组学分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 695-701.
[15]	郭楚桐, 欧阳春艳, 何俊贤, 季树宇, 杨礼腾, 刘晓宇. 屋尘螨第十类变应原的克隆、表达、纯化及免疫原性分析[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2020, 38(6): 723-729.