中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2014, Vol. 32 ›› Issue (2): 2-86-95.
杜晓峰1，徐斌2，刘建1，王吉鹏1，刘牧1，刘秀凤1，马晓琳1，胡薇1，2，鞠川2 *
DU Xiao-feng1，XU Bin2，LIU Jian1，WANG Ji-peng1，LIU Mu1，LIU Xiu-feng1，MA Xiao-lin1，HU Wei1，2，JU Chuan2 *
摘要： 目的 克隆表达日本血吸虫钙蛋白酶（Sjcalpain），了解Sjcalpain在尾蚴内的分布及其在尾蚴侵染中的作用。 方法 根据SjCalpain基因全序列（GenBank登录号为AB016726）设计引物，PCR分别扩增Sjcalpain的催化位点区域和Ca2+ 结合位点区域的基因片段，克隆入pET-28a原核表达载体，并在大肠埃希菌（E. coli）BL21（DE3）中进行原核表达，组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析蛋白表达和纯化情况。纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔多克隆抗体，ELISA和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测多克隆抗体的效价和特异性。利用免疫荧光定位技术观察Sjcalpain在尾蚴组织中的分布情况。将尾蚴和钙蛋白酶抑制剂孵育后感染小鼠，计算血吸虫减虫率。 结果 成功构建了Sjcalpain的催化位点/pET-28a和Ca2+结合位点/pET-28a原核表达重组质粒，在E. coli BL21（DE3）中成功表达目的蛋白，相对分子质量（Mr）约为43 000和39 000，与预期大小一致，且均为包涵体表达。组氨酸标签亲和层析成功纯化得到目的重组蛋白。间接ELISA结果显示，多克隆抗体的效价超过1 ∶ 80 000。免疫定位结果显示，Sjcalpain在日本血吸虫尾蚴头部分布较多。尾蚴侵染抑制实验中，钙蛋白酶抑制剂作用组平均获虫19条，对照组平均获虫23条，减虫率为17.4%。 结论 Sjcalpain蛋白产物主要分布在日本血吸虫尾蚴的头部；Sjcalpain被抑制后可以减少入侵宿主的尾蚴数量，说明Sjcalpain在尾蚴感染宿主皮肤过程中发挥一定的作用。
