粉尘螨变应原Der f Mag 29的克隆、表达及生物信息学分析

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (6): 16-480-482.

粉尘螨变应原Der f Mag 29的克隆、表达及生物信息学分析

孙金霞，俞黎黎，周鹰，卞勇华，杨李，王楠，崔玉宝

盐城卫生职业技术学院医学检验学院，盐城 224006

出版日期:2013-12-30 发布日期:2014-02-28

Cloning，Expression and Analysis of Der f Mag 29 Allergen of Dermatophagoides farinae

SUN Jin-xia, YU Li-li, ZHOU Ying, BIAN Yong-hua, YANG Li, WANG Nan, CUI Yu-bao

College of Medical Laboratory, Yancheng Institute of Health Science, Jiangsu , Yancheng 224006, China

Online:2013-12-30 Published:2014-02-28

摘要/Abstract

摘要： 提取粉尘螨总RNA，根据GenBank中的序列（登录号为AY283281.1）设计并合成引物，RT-PCR扩增Mag 29全长基因，克隆至pCold TF DNA载体，转化至大肠埃希菌（E.　coli）JM109，取阳性克隆测序鉴定。将pCold TF-Mag 29质粒转化至BL21，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）验证表达产物，采用生物信息学软件预测Mag 29的结构、理化特性和生物进化关系。RT-PCR产物电泳结果显示，在429 bp处有一条带，与 Mag 29基因大小一致，测序鉴定表明质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示，表达产物的全细胞、上清和沉淀物中均有相对分子质量（M_r）为63 000的蛋白表达，与预测值一致，其中上清中蛋白表达量高于沉淀。生物信息学分析显示，该蛋白是由142个氨基酸组成的M_r 15 100的分子，二级结构由α螺旋（55.63%）、延伸主链（3.52%）和无规则卷曲（40.85%）组成，是亲水性细胞质蛋白，与热休克蛋白70家族具有较高同源性。

关键词: 粉尘螨, 变应原, 生物信息学

Abstract: The full-length Mag 29 gene of Dermatophagoides farinae was amplified by RT-PCR with a pair of specific primers. The PCR product was cloned into pCold TF DNA vector. The constructed plasmid pCold TF-Mag 29 was transformed into E.　coli BL21 and followed by expression of the protein induced by IPTG. The recombinant protein was analyzed by SDS-PAGE. The full-length Mag 29 gene was 429 bp. A specific band （M_r 63 000） were detected in the whole cells, the supernatant, and the precipitate. Bioinformatics analysis revealed that Mag 29 protein was composed with 142 amino acid residues with a calculated molecular weight of M_r 15 100, and its secondary structure was composed of alpha helix （55.63%）, extended strand（3.52%）, and random coil （40.85%）. The Mag 29 allergen was a hydrophilic and cytoplasmic protein, and shared a high degree homology with the heat shock protein 70 family.

Key words: Dermatophagoides farinae, Allergen, Bioinformatics

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