不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺 2，3-双加氧酶的实验研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2013, Vol. 31 ›› Issue (3): 6-188-192.

不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺 2，3-双加氧酶的实验研究

单骄宇1，2，李海涛1，3，李春燕2，肖晋2，李亮1，张雪1，林仁勇1，温浩1，3 *

1　新疆医科大学第一附属医院，新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室，乌鲁木齐 830054；2　新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室，乌鲁木齐 830054；3　新疆医科大学第一附属医院肝胆包虫病外科，乌鲁木齐 830054

出版日期:2013-06-30 发布日期:2013-07-17

Different Echinococcus granulosus Antigens Induced Indoleamine 2，3-dioxygenase Expression in Dendritic Cells

SHAN Jiao-yu1,2, LI Hai-tao1,3, LI Chun-yan2, XIAO Jin2, LI Liang1, ZHANG Xue1, LIN Ren-yong1, WEN Hao1,3 *

1 State Key Laboratory Incubation Base of Xinjiang Major Diseases Research, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China; 2 Department of Human Parasitology, School of Basic Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China; 3 Department of Hepatobiliary Diseases, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China

Online:2013-06-30 Published:2013-07-17

摘要/Abstract

摘要： 目的检测不同的棘球蚴抗原体外诱导树突状细胞（DCs）表达吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）的情况。方法从C57BL/6小鼠股骨中分离出骨髓细胞，用小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）诱导后，获得小鼠骨髓源树突状细胞（BMDCs）。分别用重组抗原B（rAgB，15 μg/ml）、小鼠细粒棘球蚴囊液（MHF，5 mg/ml）、γ干扰素（IFN-γ，1 000 U/ml，为阳性对照）和RPMI 1640完全培养液（阴性对照）刺激DCs，于18、24和48 h后收集细胞和细胞上清。采用流式细胞术检测各组DCs的表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达情况，并利用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）检测各组的IDO mRNA相对转录水平。利用高效液相色谱法（HPLC）检测各组细胞上清中的色氨酸（Try）浓度。结果流式细胞术检测结果显示，DCs受rAgB和MHF刺激后，其表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达率均降低。刺激24 h后，rAgB组的CD40、CD86和I-A/I-E 阳性表达率分别为（22.60±2.69）%、（35.50±4.38）%和（57.30±4.38）%，与MHF组［（38.00±3.54）%、（53.00±3.39）%和（77.10±1.70）%］和阴性对照［（37.95±3.61）%、（19.55±1.06）%和（85.45±1.63）%］的差异均有统计学意义（P<0.05）。FQ-RT-PCR结果显示，刺激18、24和48 h后，rAgB组的IDO mRNA水平［（9.20±0.01）、（29.44±0.02）和（16.48±0.04）］和MHF组的［（9.67±0.02）、（17.52±0.01）和（16.81±0.01）］均高于阴性对照组［（2.46±0.01）、（7.77±0.01）和（10.56±0.01）］（P<0.01），rAgB组和MHF组IDO mRNA水平的差异均有统计学意义（P<0.05）。HPLC结果显示，刺激18、24和48 h后，rAgB组DCs上清中的色氨酸浓度［（23.65±0.64）、（13.95±1.06）和（19.05±0.64）μmol/L］均较其他3组低，刺激24 h后的色氨酸浓度与阴性对照组（22.90±0.14）和MHF组（20.65±0.35）的差异均有统计学意义（P<0.05）。　　结论在体外实验条件下，rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达，作用24 h后，rAgB上调IDO的能力强于MHF。

关键词: 细粒棘球蚴, 抗原, 树突状细胞, 吲哚胺2, 3-双加氧酶, 免疫逃避

Abstract: Objective To observe the expression of indoleamine 2, 3-dioxygenase （IDO） in dendritic cells　（DCs） via different Echinococcus granulosus antigens in vitro. 　Methods Bone Marrow DCs generated from bone marrow precursor cells of C57BL/6 mice and cultured in the presence of recombinant mouse GM-CSF（rmGM-CSF）. Then, DCs were induced with 15 μg/ml recombinant antigen B （rAgB）, 5 mg/ml mouse hydatid fluid （MHF）, 1 000 U/ml IFN-γ （as positive control）, and RPMI 1640 complete medium（as negative control）, respectively. Meanwhile, the treated DCs and cell supernatants were collected at 18, 24 and 48 h after induction. The positive expressions of D40, CD80, CD86 and I-A/I-E on DCs were determined by flow cytometry. By real-time fluorescent quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction（FQ-RT-PCR）, the expression level of IDO mRNA in DCs was measured. Concentrations of tryptophan （Try） were tested by high-performance liquid chromatography （HPLC） assay in cell supernatant. Results The data from flow cytometry showed that the positive expressions of CD40, CD80, CD86, I-A/I-E were decreased after stimulated by rAgB and MHF. At 24 h after induction, there was significant difference in the level of CD40, CD86 and I-A/I-E among rAgB-treated group ［（22.60±2.69）%, （35.50±4.38）%, （57.30±4.38）%］, MHF-treated group ［（38.00±3.54）%, （53.00±3.39）%,　（77.10±1.70）%］ and negative control ［（37.95±3.61）%,（19.55±1.06）% and（85.45±1.63）%］（P<0.05）. At 18, 24 and 48 h after induction, the levels of IDO mRNA in rAgB-treated group ［（9.20±0.01）, （29.44±0.02）, （16.48±0.04）］ and MHF-treated group ［（9.67±0.02）, （17.52±0.01）, （16.81±0.01）］ was higher than that of negative control group［（2.46±0.01）, （7.77±0.01）, and（10.56±0.01）］（P<0.01）. And significant difference was found between rAgB-treated group and MHF-treated group （P<0.05）. At 18, 24 and 48 h after induction, the concentrations of Try were lowest in rAgB-treated group ［（23.65±0.64）, （13.95±1.06）, （19.05±0.64） μmol/L］. At 24 h after induction, Try concentration in negative control group（22.90±0.14） was higher than that of MHF-treated group （20.65±0.34）（P<0.05）. Conclusion Under in vitro condition, rAgB and MHF can up-regulate IDO expression. The ability of rAgB to up-regulate IDO activity was stronger than that of MHF at 24 h after induction.

单骄宇1，2，李海涛1，3，李春燕2，肖晋2，李亮1，张雪1，林仁勇1，温浩1，3 *. 不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺 2，3-双加氧酶的实验研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2013, 31(3): 6-188-192.

SHAN Jiao-yu1,2, LI Hai-tao1,3, LI Chun-yan2, XIAO Jin2, LI Liang1, ZHANG Xue1, LIN Ren-yong1, WEN Hao1,3 *. Different Echinococcus granulosus Antigens Induced Indoleamine 2，3-dioxygenase Expression in Dendritic Cells[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases, 2013, 31(3): 6-188-192.

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