微小牛蜱磷酸丙糖异构酶基因片段的克隆与原核表达

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2012, Vol. 30 ›› Issue (4): 20-331-332.

微小牛蜱磷酸丙糖异构酶基因片段的克隆与原核表达

梁怡琳，高攀，柯泽楷，罗新萍*，刘志刚

深圳大学过敏反应与免疫学研究所，深圳 518060

出版日期:2012-08-30 发布日期:2012-10-26

Cloning and Expression of Triosephosphate Isomerase Gene of Boophilus microplus

LIANG Yi-lin，GAO Pan，KE Ze-kai，LUO Xin-ping*，LIU Zhi-gang

School of Medicine，Shenzhen University，Shenzhen 518060，China

Online:2012-08-30 Published:2012-10-26

摘要/Abstract

摘要： 为克隆和表达微小牛蜱磷酸丙糖异构酶（triosephosphate isomerase，Tim）编码基因，提取微小牛蜱成虫总RNA，采用RT-PCR方法扩增目的基因，将其连入pMD-18T载体，经酶切和测序鉴定后，将正确的目的基因与pET-28a表达载体连接，并转入大肠埃希菌（E. coli）Rosetta （DE3）中，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定分析。结果发现，克隆所得的微小牛蜱成虫tim基因片段长度为750 bp（登录号为JX112888），其中开放阅读框为750 bp，编码249个氨基酸，与微小牛蜱胚胎中克隆出的tim基因序列的同源性为99%。SDS-PAGE结果显示，重组蛋白Tim相对分子质量（M_r）约为27 000。

关键词: 微小牛蜱, 磷酸丙糖异构酶, 克隆, 表达

Abstract: Total RNA was extracted from adult Boophilus microplus. RT-PCR was used to amplify the gene and the fragment was subcloned into the expression vector pET-28a. The cloned gene was expressed in E. coli Rosseta（DE3）, induced by IPTG， and identified by SDS-PAGE. The results showed that the triosephosphate isomerase （tim） gene of B. microplus has 750 bp and encodes 249 amino acids （GenBank No. JX112888）. The cloned tim gene shares 99% homology with that in tick embryos. The relative molecular weight （M_r） of the expressed recombinant protein is about 27 000.

Key words: Boophilus microplus, Triosephosphate isomerase, Cloning, Expression

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