中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (4): 1-241-246.
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孙蕊, 李正宇, 何汉江, 吕志跃, 吴忠道
SUN Juan, LI Zheng-Yu, HE Han-Jiang, LV Zhi-Ti, TUN Zhong-Dao
摘要: 目的 克隆、表达野生型秀丽隐杆线虫C31B8.8基因,并分析其免疫特性。 方法 提取人工培养的秀丽隐杆线虫总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增C31B8.8基因,克隆入pMD-18T载体,测序正确后将C31B8.8基因亚克隆入带有组氨酸标签的表达载体pET-30a,转入大肠埃希菌BL21中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,表达目的蛋白C31B8.8。用钴离子柱亲和层析法纯化该蛋白。融合蛋白采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定和蛋白质印迹(Western blotting)分析。10只BALB/c小鼠随机均分为抗原免疫组和佐剂对照组,抗原免疫组以纯化的重组C31B8.8蛋白免疫小鼠,抗原免疫剂量为40 g/(只·次),共免疫4次,每周免疫1次。佐剂对照组以PBS代替抗原,同法免疫小鼠。每次免疫前取血,末次免疫后1周眼球采血,分离血清,ELISA检测不同时期血清抗体效价。同时以C31B8.8蛋白和广州管圆线虫Ⅳ期幼虫虫体可溶性蛋白作为抗原进行Western blotting。 结果 DNA测序结果显示重组质粒构建成功,并诱导出重组C31B8.8蛋白。重组蛋白经质谱鉴定和Western blotting分析证实为目的蛋白。纯化C31B8.8蛋白免疫小鼠后,与对照组相比,能产生较高的抗体水平。Western blotting分析显示,重组C31B8.8蛋白能被免疫血清识别,且免疫血清与广州管圆线虫Ⅳ期幼虫虫体可溶性抗原存在交叉反应。 结论 秀丽隐杆线虫C31B8.8蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性,重组C31B8.8蛋白免疫小鼠血清与广州管圆线虫Ⅳ期幼虫虫体可溶性抗原存在交叉反应。