中国寄生虫学与寄生虫病杂志 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (2): 6-111-116.
单骄宇1，2，纪卫政1，吐尔洪江·吐逊1，李亮1，张传山1，林仁勇1，温浩1 *
SHAN Jiao-yu1，2，JI Wei-zheng1，Turgun Tursun1，LI Liang1，ZHANG Chuan-shan1，LIN Ren-yong1，WEN Hao1 *
摘要： 目的 观察细粒棘球蚴重组抗原B （rAgB）体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2，3-鄄双加氧酶（IDO）的情况。 方法 从小鼠股骨中分离出骨髓细胞，进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）的诱导，培养并获得CD11c+ 树突状细胞。应用倒置显微镜和扫描电镜观察树突状细胞形态，采用流式细胞术检测其表面标志物；用混合淋巴细胞反应（MLR）观察树突状细胞对T淋巴细胞的增殖能力。培养至第6天，收集未成熟树突状细胞进行流式细胞术检测；另向部分未成熟树突状细胞中加脂多糖（LPS）刺激24 h后，收集成熟树突状细胞，进行流式细胞术检测。在获得的未成熟树突状细胞中分别加入RPMI 1640完全培养液（为阴性对照组）、 重组小鼠γ干扰素（rmIFN-γ，1 000 U/ml，为IFN-γ组）和rAgB（终浓度15 μg/ml， 为rAgB组）， 培养24 h后， 通过细胞免疫组织化学和蛋白质印迹（Western blotting）检测各组树突状细胞IDO的表达情况。 结果 获得纯度为80%的CD11c+ 树突状细胞，在倒置显微镜和扫描电镜下均观察到典型树突状细胞。经LPS刺激的成熟树突状细胞的CD40、CD80和主要组织相容性复合体（MHC）Ⅱ类分子IA/IE的阳性表达率与未成熟树突状细胞的相比，差异均有统计学意义（均P<0.05）。MLR结果显示，诱导形成的树突状细胞具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。细胞免疫组织化学方法检测结果显示，阴性对照组、阳性对照组和rAgB组的IDO阳性表达率分别为（4.544±1.752）%、（20.464±4.452）%和（11.148±1.966）%， 3组间的差异均有统计学意义（均P<0.05）。Western blotting结果表明，3组IDO蛋白与相应甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）蛋白的灰度值之比分别为（0.229±0.085）、 （0.794±0.114）和（0.573±0.129）， 其中rAgB组与阴性对照组相比差异有统计学意义（P<0.05），与IFN-γ组相比差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 细粒棘球蚴重组抗原B在体外具有诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的功能。
